TC-1

TC-1 è una linea cellulare epiteliale polmonare murina trasformata con gli oncogeni E6 ed E7 del papillomavirus umano di tipo 16 (HPV16), insieme a un oncogene H-ras attivato. La linea cellulare è stata sviluppata da cellule epiteliali polmonari primarie di topi C57BL/6 utilizzando una strategia di trasduzione retrovirale doppia. Inizialmente, per veicolare gli oncogeni E6 ed E7 è stato utilizzato un vettore retrovirale derivato dal virus della leucemia murina di Moloney (MoMLV), come pLXSN-16E6E7. In questo vettore, i geni sono espressi dal promotore virale 5′ LTR e un gene di resistenza alla neomicina (Neo^R) sotto il controllo di un promotore SV40 interno ha consentito la selezione con G418. L'espressione stabile di E6 ed E7 determina l'inattivazione delle vie tumorali soppressive p53 e Rb, favorendo l'immortalizzazione cellulare.

Dopo la selezione iniziale, è stato introdotto un secondo vettore retrovirale basato su MoMLV che codifica un gene H-ras (G12V) attivato per completare la trasformazione. Questo vettore trasportava un marcatore selezionabile diverso, tipicamente un gene di resistenza all'igromicina (hph), guidato da un promotore interno come SV40 o PGK. Le cellule sopravvissute alla selezione sequenziale con G418 e igromicina hanno dimostrato un'integrazione stabile di tutti e tre gli oncogeni, con conseguente trasformazione completa e immortalizzazione delle cellule TC-1.

Negli studi funzionali, le cellule TC-1 mostrano una forte espressione delle molecole MHC di classe I, che le rende altamente immunogeniche e ampiamente utilizzate per la valutazione di vaccini sperimentali e immunoterapie mirate alle neoplasie associate all'HPV. Sono state fondamentali negli studi preclinici sui vaccini, in particolare quelli volti a suscitare risposte delle cellule T CD8⁺ contro l'HPV16 E7. Inoltre, sono state sviluppate sottolinee con espressione MHC di classe I sottoregolata per imitare i meccanismi di fuga immunitaria, fornendo ulteriori approfondimenti sull'interazione tra le cellule tumorali e l'immunità dell'ospite. Queste proprietà rendono TC-1 un modello robusto e versatile per l'immuno-oncologia e lo sviluppo di vaccini contro l'HPV.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia