TC-1

TC-1 yra pelių plaučių epitelio ląstelių linija, transformuota žmogaus papilomos viruso 16 tipo (HPV16) E6 ir E7 onkogenais, kartu su aktyvuotu H-ras onkogenu. Ląstelių linija buvo sukurta iš C57BL/6 pelių pirminių plaučių epitelio ląstelių, naudojant dvigubą retrovirusinę transdukcijos strategiją. Iš pradžių E6 ir E7 onkogenams perduoti buvo naudojamas retrovirusinis vektorius, gautas iš Moloney pelių leukemijos viruso (MoMLV), pvz., pLXSN-16E6E7. Šiame vektoriuje genai yra ekspresuojami iš virusinio 5′ LTR promotoriaus, o neomicino atsparumo genas (Neo^R), kontroliuojamas vidinio SV40 promotoriaus, leido atranką su G418. Stabili E6 ir E7 ekspresija sukelia p53 ir Rb naviko slopintuvų kelių inaktyvaciją, skatinančią ląstelių nemirtingumą.

Po pradinės selekcijos, siekiant užbaigti transformaciją, buvo įvestas antrasis MoMLV pagrįstas retrovirusinis vektorius, koduojantis aktyvuotą H-ras (G12V) geną. Šis vektorius nešė kitą atrankos žymeklį, paprastai higromicino atsparumo geną (hph), valdomą vidinio promotoriaus, pvz., SV40 arba PGK. Ląstelės, išgyvenusios nuoseklią atranką su G418 ir higromicinu, parodė stabilią visų trijų onkogenų integraciją, dėl to TC-1 ląstelės buvo visiškai transformuotos ir nemirtingos.

Funkcinių tyrimų metu TC-1 ląstelės parodė stiprią MHC I klasės molekulių ekspresiją, todėl jos yra labai imunogeniškos ir plačiai naudojamos eksperimentinių vakcinų ir imunoterapijų, skirtų HPV susijusiems piktybiniams navikams, vertinimui. Jos buvo labai naudingos ikiklinikiniuose vakcinų tyrimuose, ypač tuose, kurių tikslas buvo išprovokuoti CD8⁺ T ląstelių atsaką prieš HPV16 E7. Be to, buvo sukurtos sublinijos su sumažintu MHC I klasės ekspresijos lygiu, siekiant imituoti imuninio pabėgimo mechanizmus, suteikiant daugiau informacijos apie naviko ląstelių ir šeimininko imuniteto sąveiką. Šios savybės daro TC-1 patikimu ir universaliu modeliu imunologinės onkologijos ir HPV vakcinos kūrimui.

37 °C, 5 %_CO2, drėkintoje atmosferoje.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mikoplazmos užterštumas atmetamas taikant PGR pagrįstus tyrimus ir liuminescencinius mikoplazmos aptikimo metodus.

Siekiant užtikrinti, kad nebūtų užteršimo bakterijomis, grybeliais ar mielėmis, ląstelių kultūros kasdien vizualiai tikrinamos.

Norėdami ilgai saugoti, įdėkite buteliukus į garų fazės skystą azotą maždaug -150-196 °C temperatūroje. Laikymas -80 °C temperatūroje yra priimtinas tik kaip trumpas tarpinis etapas prieš perkeliant į skystąjį azotą.

Kriokonservuotos ląstelių linijos gabenamos ant sauso ledo patvirtintoje, izoliuotoje pakuotėje su pakankamu kiekiu šaldymo skysčio, kad pervežimo metu būtų palaikoma maždaug -78 °C temperatūra. Gavę pakuotę, nedelsdami ją apžiūrėkite ir nedelsdami perkelkite mėgintuvėlius į tinkamą saugyklą.

" Cytion" garantuoja savo produktų kokybę ir gyvybingumą. Garantuojame, kad mūsų ląstelės bus gyvybingos kultūrų auginimo pradžioje 60 dienų po išsiuntimo iš mūsų gamyklos. Užtikriname, kad visos medžiagos atitinka analizės sertifikate ir (arba) gaminio lape aprašytas specifikacijas

Išsamią informaciją rasite mūsų <a href=""/Kas mes esame/garantijos/" hreflang=""x-default"">Garantijos pareiškime