TC-1

TC-1 هو خط خلايا ظهارية رئوية فئرانية تم تحويلها بواسطة جينات سرطانية من نوع 16 (HPV16) E6 و E7 من فيروس الورم الحليمي البشري، إلى جانب جين سرطاني H-ras منشط. تم تطوير خط الخلايا من خلايا ظهارة الرئة الأولية لفئران C57BL/6 باستخدام استراتيجية نقل ثنائية للفيروسات القهقرية. في البداية، تم استخدام ناقل فيروسي قهقري مشتق من فيروس سرطان الدم الفئراني Moloney (MoMLV)، مثل pLXSN-16E6E7، لنقل الجينات المسرطنة E6 و E7. في هذا الناقل، يتم التعبير عن الجينات من مروج 5′ LTR الفيروسي، وجين مقاومة النيوميسين (Neo^R) تحت سيطرة مروج SV40 داخلي مما سمح بالانتقاء باستخدام G418. يؤدي التعبير المستقر عن E6 و E7 إلى تعطيل مسارات مثبطات الأورام p53 و Rb، مما يؤدي إلى خلود الخلايا.

بعد الاختيار الأولي، تم إدخال ناقل فيروسي عكسي ثانٍ قائم على MoMLV يشفر جين H-ras (G12V) المنشط لإكمال التحول. حمل هذا الناقل علامة قابلة للاختيار مختلفة، عادةً جين مقاومة الهيجرومايسين (hph)، مدفوعًا بمروج داخلي مثل SV40 أو PGK. أظهرت الخلايا التي نجت من الاختيار المتسلسل باستخدام G418 والهيجرومايسين تكاملًا مستقرًا لجميع الجينات السرطانية الثلاثة، مما أدى إلى تحويل خلايا TC-1 بالكامل وجعلها خالدة.

في الدراسات الوظيفية، أظهرت خلايا TC-1 تعبيرًا قويًا عن جزيئات MHC من الفئة الأولى، مما يجعلها شديدة المناعية وتستخدم على نطاق واسع لتقييم اللقاحات التجريبية والعلاجات المناعية التي تستهدف الأورام الخبيثة المرتبطة بفيروس الورم الحليمي البشري. وقد لعبت دورًا أساسيًا في الدراسات ما قبل السريرية للقاحات، لا سيما تلك التي تهدف إلى إثارة استجابات خلايا T CD8⁺ ضد HPV16 E7. بالإضافة إلى ذلك، تم تطوير سلالات فرعية ذات تعبير منخفض عن MHC من الفئة I لتقليد آليات الهروب المناعي، مما يوفر مزيدًا من الأفكار حول التفاعل بين الخلايا السرطانية ومناعة المضيف. هذه الخصائص تجعل TC-1 نموذجًا قويًا ومتعدد الاستخدامات لعلم المناعة الأورام وتطوير لقاح فيروس الورم الحليمي البشري.

37 درجة مئوية، و5% من _ثاني أكسيد الكربون في جو مرطب.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

يُستبعد التلوث بالميكوبلازما باستخدام كل من المقايسات القائمة على تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وطرق الكشف عن الميكوبلازما القائمة على التألق.

ولضمان عدم وجود تلوث بكتيري أو فطري أو خميرة يتم إخضاع مزارع الخلايا للفحص البصري اليومي.

للحفظ طويل الأمد، ضع القوارير في نيتروجين سائل في طور البخار عند درجة حرارة تتراوح بين -150 و -196 درجة مئوية تقريباً. يُقبل التخزين عند درجة حرارة -80 درجة مئوية فقط كخطوة مؤقتة قصيرة قبل النقل إلى النيتروجين السائل.

تُشحن خطوط الخلايا المحفوظة بالتبريد على ثلج جاف في عبوات معزولة وموثوقة مع مبرد كافٍ للحفاظ على درجة حرارة -78 درجة مئوية تقريبًا طوال فترة النقل. عند الاستلام، افحص الحاوية على الفور وانقل القوارير دون تأخير إلى المخزن المناسب.

في Cytion، نلتزم في Cytion بجودة منتجاتنا وحيويتها. نحن نضمن أن تكون خلايانا قابلة للحياة في بداية الاستزراع لمدة 60 يومًا بعد الشحن من منشآتنا. نؤكد أن جميع المواد مطابقة للمواصفات الموضحة في شهادة التحليل و/أو ورقة المنتج

للحصول على التفاصيل الكاملة، يُرجى الرجوع إلى <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">بيان الضمان