TC-1

TC-1 je myší plicní epiteliální buněčná linie transformovaná onkogeny E6 a E7 lidského papilomaviru typu 16 (HPV16) spolu s aktivovaným onkogenem H-ras. Buněčná linie byla vyvinuta z primárních plicních epiteliálních buněk myší C57BL/6 pomocí strategie duální retrovirové transdukce. Zpočátku byl k dodání onkogenů E6 a E7 použit retrovirový vektor odvozený od myšího leukemického viru Moloney (MoMLV), například pLXSN-16E6E7. V tomto vektoru jsou geny exprimovány z virového promotoru 5′ LTR a gen rezistence na neomycin (Neo^R) pod kontrolou interního promotoru SV40 umožnil selekci pomocí G418. Stabilní exprese E6 a E7 vede k inaktivaci tumor supresorových drah p53 a Rb, což vede k imortalizaci buněk.

Po počáteční selekci byl zaveden druhý retrovirový vektor na bázi MoMLV kódující aktivovaný gen H-ras (G12V) k dokončení transformace. Tento vektor nesl jiný selekční marker, typicky gen rezistence na hygromycin (hph), řízený interním promotorem, jako je SV40 nebo PGK. Buňky, které přežily postupnou selekci pomocí G418 a hygromycinu, vykazovaly stabilní integraci všech tří onkogenů, což vedlo k plně transformovaným a imortalizovaným buňkám TC-1.

Ve funkčních studiích vykazují buňky TC-1 silnou expresi molekul MHC třídy I, díky čemuž jsou vysoce imunogenní a široce využívány k hodnocení experimentálních vakcín a imunoterapií zaměřených na malignity asociované s HPV. Hrají důležitou roli v preklinických studiích vakcín, zejména těch, které jsou zaměřeny na vyvolání reakcí CD8⁺ T-buněk proti HPV16 E7. Kromě toho byly vyvinuty sublinie s downregulovanou expresí MHC třídy I, které napodobují mechanismy imunitního úniku a poskytují další poznatky o vzájemném působení mezi nádorovými buňkami a imunitou hostitele. Tyto vlastnosti činí z TC-1 robustní a univerzální model pro imunoonkologii a vývoj vakcín proti HPV.

37 °C, 5 %_CO2, zvlhčená atmosféra.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminace mykoplazmaty je vyloučena jak pomocí testů založených na PCR, tak pomocí luminiscenčních metod detekce mykoplazmy.

Aby se zajistilo, že nedojde ke kontaminaci bakteriemi, plísněmi nebo kvasinkami, jsou buněčné kultury denně podrobovány vizuálním kontrolám.

Pro dlouhodobé uchování umístěte lahvičky do kapalného dusíku v plynné fázi při teplotě přibližně -150 až -196 °C. Skladování při -80 °C je přijatelné pouze jako krátký přechodný krok před přemístěním do kapalného dusíku.

Kryokonzervované buněčné linie se přepravují na suchém ledu v ověřených, izolovaných obalech s dostatečným množstvím chladiva, aby se po celou dobu přepravy udržovala teplota přibližně -78 °C. Po obdržení ihned zkontrolujte obal a neprodleně přeneste lahvičky do vhodného skladu.

Ve společnosti Cytion si stojíme za kvalitou a životaschopností našich produktů. Zaručujeme, že naše buňky budou životaschopné na začátku kultivace po dobu 60 dnů po odeslání z našich zařízení. Zaručujeme, že všechny materiály odpovídají specifikacím popsaným v certifikátu analýzy a/nebo v produktovém listu

Úplné informace naleznete v našem <a href=""/Kdo-jsme/Záruka/"" hreflang=""x-default"">Záručním prohlášení