TC-1

TC-1 er en murin lungeepitelcellelinje transformeret med humant papillomavirus type 16 (HPV16) E6- og E7-onkogener sammen med et aktiveret H-ras-onkogen. Cellelinjen blev udviklet fra primære lungeepitelceller fra C57BL/6-mus ved hjælp af en dobbelt retroviral transduktionsstrategi. Oprindeligt blev en retroviral vektor afledt af Moloney-museleukæmi-virus (MoMLV), såsom pLXSN-16E6E7, anvendt til at levere E6- og E7-onkogenerne. I denne vektor udtrykkes generne fra den virale 5′ LTR-promotor, og et neomycinresistensgen (Neo^R) under kontrol af en intern SV40-promotor muliggjorde selektion med G418. Stabil ekspression af E6 og E7 resulterer i inaktivering af p53- og Rb-tumorsuppressorveje, hvilket driver celleimmortalisering.

Efter den indledende selektion blev en anden MoMLV-baseret retroviral vektor, der kodede for et aktiveret H-ras (G12V)-gen, introduceret for at fuldføre transformationen. Denne vektor bar en anden selekterbar markør, typisk et hygromycinresistensgen (hph), drevet af en intern promotor såsom SV40 eller PGK. Celler, der overlevede sekventiel selektion med G418 og hygromycin, viste stabil integration af alle tre onkogener, hvilket resulterede i fuldt transformerede og immortaliserede TC-1-celler.

I funktionelle studier udviser TC-1-celler stærk ekspression af MHC klasse I-molekyler, hvilket gør dem meget immunogene og bredt anvendte til evaluering af eksperimentelle vacciner og immunterapier rettet mod HPV-associerede maligniteter. De har været afgørende i prækliniske vaccinstudier, især dem der har til formål at fremkalde CD8⁺ T-celle-responser mod HPV16 E7. Derudover er der udviklet sublinjer med nedreguleret MHC klasse I-ekspression for at efterligne immununddragelsesmekanismer, hvilket giver yderligere indsigt i samspillet mellem tumorceller og værtsimmunitet. Disse egenskaber gør TC-1 til en robust og alsidig model for immuno-onkologi og udvikling af HPV-vacciner.

37°C, 5%_CO2, befugtet atmosfære.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mycoplasma-kontaminering udelukkes ved hjælp af både PCR-baserede assays og luminescensbaserede mycoplasma-detektionsmetoder.

For at sikre, at der ikke er nogen bakterie-, svampe- eller gærforurening, underkastes cellekulturerne daglige visuelle inspektioner.

For langtidsopbevaring anbringes hætteglas i flydende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Opbevaring ved -80 °C er kun acceptabelt som et kort mellemtrin før overførsel til flydende nitrogen.

Kryopræserverede cellelinjer sendes på tøris i valideret, isoleret emballage med tilstrækkeligt kølemiddel til at opretholde ca. -78 °C under hele transporten. Ved modtagelse skal beholderen straks inspiceres, og hætteglassene skal straks overføres til passende opbevaring.

Hos Cytion står vi inde for vores produkters kvalitet og levedygtighed. Vi garanterer, at vores celler vil være levedygtige ved kulturens start i 60 dage efter afsendelse fra vores faciliteter. Vi sikrer, at alle materialer er i overensstemmelse med de specifikationer, der er beskrevet i analysecertifikatet og/eller produktarket

For alle detaljer henvises til vores <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring