TC-1

TC-1 je mišja pljučna epitelna celična linija, transformirana s humanim papilomavirusom tipa 16 (HPV16) E6 in E7 onkogeni, skupaj z aktiviranim H-ras onkogenom. Celična linija je bila razvita iz primarnih pljučnih epitelnih celic miši C57BL/6 z uporabo dvojne retrovirusne transdukcijske strategije. Sprva je bil za prenos onkogenov E6 in E7 uporabljen retrovirusni vektor, pridobljen iz mišjega levkemijskega virusa Moloney (MoMLV), kot je pLXSN-16E6E7. V tem vektorju se geni izražajo iz virusnega promotorja 5′ LTR, gen za odpornost proti neomicinu (Neo^R) pod nadzorom notranjega promotorja SV40 pa je omogočil selekcijo z G418. Stabilna ekspresija E6 in E7 povzroči inaktivacijo poti tumorjev p53 in Rb, kar vodi k nesmrnosti celic.

Po začetni selekciji je bil za dokončanje transformacije uveden drugi retrovirusni vektor na osnovi MoMLV, ki kodira aktiviran gen H-ras (G12V). Ta vektor je nosil drugačen selektibilni marker, običajno gen za odpornost proti higromicinu (hph), ki ga poganja notranji promotor, kot je SV40 ali PGK. Celice, ki so preživele zaporedno selekcijo z G418 in higromicinom, so pokazale stabilno integracijo vseh treh onkogenov, kar je povzročilo popolnoma transformirane in imortalizirane celice TC-1.

V funkcionalnih študijah celice TC-1 kažejo močno izražanje molekul MHC razreda I, zaradi česar so zelo imunogene in se široko uporabljajo za ocenjevanje eksperimentalnih cepiv in imunoterapij, usmerjenih v malignosti, povezane s HPV. Bile so ključne v predkliničnih študijah cepiv, zlasti tistih, ki so bile usmerjene v sprožanje odzivov CD8⁺ T-celic proti HPV16 E7. Poleg tega so bile razvite podvrste z zmanjšano ekspresijo MHC razreda I, ki posnemajo mehanizme imunskega izogibanja, kar omogoča dodatne vpoglede v medsebojno delovanje tumorjev in imunosti gostitelja. Te lastnosti naredijo TC-1 robusten in vsestranski model za razvoj imunoonkologije in cepiv proti HPV.

37 °C, 5 %_CO2, vlažno ozračje.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminacija z mikoplazmo se izključi z uporabo testov na podlagi PCR in metod za odkrivanje mikoplazme na podlagi luminiscence.

Da se zagotovi, da ni kontaminacije z bakterijami, glivami ali kvasovkami, se celične kulture dnevno vizualno pregledujejo.

Za dolgotrajno shranjevanje viale postavite v tekoči dušik v parni fazi pri približno -150 do -196 °C. Shranjevanje pri -80 °C je sprejemljivo le kot kratek vmesni korak pred prenosom v tekoči dušik.

Kriokonzervirane celične linije se pošiljajo na suhem ledu v potrjeni, izolirani embalaži z zadostno količino hladilnega sredstva, da se med prevozom vzdržuje približno -78 °C. Ob prejemu takoj preglejte embalažo in viale nemudoma prenesite v ustrezno skladišče.

V podjetju Cytion stojimo za kakovostjo in uporabnostjo svojih izdelkov. Zagotavljamo, da bodo naše celice ob začetku gojenja še 60 dni po odpremi iz naših obratov vitalne. Zagotavljamo, da so vsi materiali skladni s specifikacijami, opisanimi v potrdilu o analizi in/ali listu izdelka

Za vse podrobnosti si oglejte našo <a href=""/Kdo smo/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garancijsko izjavo