TC-1

TC-1 er en murin lungeepitelcellelinje transformert med humant papillomavirus type 16 (HPV16) E6- og E7-onkogener, sammen med et aktivert H-ras-onkogen. Cellelinjen ble utviklet fra primære lungeepitelceller fra C57BL/6-mus ved hjelp av en dobbel retroviral transduksjonsstrategi. I utgangspunktet ble en retroviral vektor avledet fra Moloney murint leukemivirus (MoMLV), slik som pLXSN-16E6E7, brukt til å levere E6- og E7-onkogenene. I denne vektoren uttrykkes genene fra den virale 5′ LTR-promotoren, og et neomycinresistensgen (Neo^R) under kontroll av en intern SV40-promotor muliggjorde seleksjon med G418. Stabil ekspresjon av E6 og E7 resulterer i inaktivering av p53- og Rb-tumorsuppressorveier, noe som driver celleimmortalisering.

Etter den første seleksjonen ble en andre MoMLV-basert retroviral vektor som koder for et aktivert H-ras (G12V)-gen introdusert for å fullføre transformasjonen. Denne vektoren bar en annen selekterbar markør, typisk et hygromycinresistensgen (hph), drevet av en intern promotor som SV40 eller PGK. Celler som overlevde sekvensiell seleksjon med G418 og hygromycin, viste stabil integrasjon av alle tre onkogenene, noe som resulterte i fullstendig transformerte og immortalisert TC-1-celler.

I funksjonelle studier viser TC-1-celler sterk ekspresjon av MHC klasse I-molekyler, noe som gjør dem svært immunogene og mye brukt for å evaluere eksperimentelle vaksiner og immunterapier rettet mot HPV-assosierte maligniteter. De har vært avgjørende i prekliniske vaksineundersøkelser, særlig de som er rettet mot å fremkalle CD8⁺ T-celle-responser mot HPV16 E7. I tillegg er det utviklet sublinjer med nedregulert MHC klasse I-ekspresjon for å etterligne immunfluktmekanismer, noe som gir ytterligere innsikt i samspillet mellom tumorceller og vertsimmunitet. Disse egenskapene gjør TC-1 til en robust og allsidig modell for immuno-onkologi og utvikling av HPV-vaksiner.

37 °C, 5 %_CO2, befuktet atmosfære.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasma-kontaminering utelukkes ved hjelp av både PCR-baserte analyser og luminescensbaserte metoder for påvisning av mykoplasma.

For å sikre at det ikke finnes bakterie-, sopp- eller gjærkontaminering, blir cellekulturene inspisert visuelt hver dag.

For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.

Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.

Hos Cytion står vi bak kvaliteten og levedyktigheten til produktene våre. Vi garanterer at cellene våre vil være levedyktige ved starten av dyrkingen i 60 dager etter at de er sendt fra våre anlegg. Vi forsikrer at alle materialer er i samsvar med spesifikasjonene som er beskrevet i analysesertifikatet og/eller produktarket

For fullstendig informasjon, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring