TC-1

Το TC-1 είναι μια κυτταρική σειρά πνευμονικών επιθηλιακών κυττάρων ποντικού που έχει μετασχηματιστεί με τα ογκογονίδια E6 και E7 του ιού των ανθρώπινων θηλωμάτων τύπου 16 (HPV16), μαζί με ένα ενεργοποιημένο ογκογονίδιο H-ras. Η κυτταρική σειρά αναπτύχθηκε από πρωτογενή επιθηλιακά κύτταρα πνεύμονα ποντικών C57BL/6 χρησιμοποιώντας μια στρατηγική διπλής ρετροϊικής μεταγωγής. Αρχικά, ένας ρετροϊικός φορέας που προέρχεται από τον ιό της λευχαιμίας ποντικών Moloney (MoMLV), όπως ο pLXSN-16E6E7, χρησιμοποιήθηκε για τη μεταφορά των ογκογονιδίων E6 και E7. Σε αυτόν τον φορέα, τα γονίδια εκφράζονται από τον ιικό προαγωγό 5′ LTR, και ένα γονίδιο αντοχής στη νεομυκίνη (Neo^R) υπό τον έλεγχο ενός εσωτερικού προαγωγού SV40 επέτρεψε την επιλογή με G418. Η σταθερή έκφραση των E6 και E7 έχει ως αποτέλεσμα την αδρανοποίηση των οδών καταστολής όγκων p53 και Rb, οδηγώντας στην αθανατοποίηση των κυττάρων.

Μετά την αρχική επιλογή, εισήχθη ένας δεύτερος ρετροϊικός φορέας με βάση το MoMLV που κωδικοποιεί ένα ενεργοποιημένο γονίδιο H-ras (G12V) για να ολοκληρωθεί η μετασχηματισμός. Αυτός ο φορέας έφερε έναν διαφορετικό επιλέξιμο δείκτη, συνήθως ένα γονίδιο ανθεκτικότητας στην υγρομυκίνη (hph), που οδηγείται από έναν εσωτερικό προαγωγό όπως το SV40 ή το PGK. Τα κύτταρα που επέζησαν της διαδοχικής επιλογής με G418 και υγρομυκίνη έδειξαν σταθερή ενσωμάτωση και των τριών ογκογονιδίων, με αποτέλεσμα πλήρως μετασχηματισμένα και αθανατοποιημένα κύτταρα TC-1.

Σε λειτουργικές μελέτες, τα κύτταρα TC-1 εμφανίζουν ισχυρή έκφραση μορίων MHC κλάσης I, καθιστώντας τα ιδιαίτερα ανοσογόνα και ευρέως χρησιμοποιούμενα για την αξιολόγηση πειραματικών εμβολίων και ανοσοθεραπειών που στοχεύουν σε κακοήθειες σχετιζόμενες με τον HPV. Έχουν διαδραματίσει καθοριστικό ρόλο σε προκλινικές μελέτες εμβολίων, ιδιαίτερα σε εκείνες που στοχεύουν στην πρόκληση αντιδράσεων CD8⁺ Τ-κυττάρων κατά του HPV16 E7. Επιπλέον, έχουν αναπτυχθεί υπογραμμές με μειωμένη έκφραση MHC κλάσης I για να μιμηθούν τους μηχανισμούς διαφυγής του ανοσοποιητικού συστήματος, παρέχοντας περαιτέρω πληροφορίες για την αλληλεπίδραση μεταξύ των καρκινικών κυττάρων και της ανοσίας του ξενιστή. Αυτές οι ιδιότητες καθιστούν το TC-1 ένα ισχυρό και ευέλικτο μοντέλο για την ανοσο-ογκολογία και την ανάπτυξη εμβολίων HPV.

37°C, 5%_CO2, υγροποιημένη ατμόσφαιρα.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Η μόλυνση από μυκόπλασμα αποκλείεται με τη χρήση τόσο των δοκιμασιών που βασίζονται στην PCR όσο και των μεθόδων ανίχνευσης μυκοπλάσματος με βάση τη φωταύγεια.

Για να διασφαλιστεί ότι δεν υπάρχει μόλυνση από βακτήρια, μύκητες ή ζύμες, οι κυτταροκαλλιέργειες υποβάλλονται σε καθημερινές οπτικές επιθεωρήσεις.

Για μακροχρόνια συντήρηση, τοποθετήστε τα φιαλίδια σε υγρό άζωτο σε φάση ατμών σε θερμοκρασία περίπου -150 έως -196 °C. Η αποθήκευση στους -80 °C είναι αποδεκτή μόνο ως σύντομο ενδιάμεσο βήμα πριν από τη μεταφορά σε υγρό άζωτο.

Οι κρυοσυντηρημένες κυτταρικές σειρές αποστέλλονται σε ξηρό πάγο σε επικυρωμένη, μονωμένη συσκευασία με επαρκές ψυκτικό μέσο για τη διατήρηση περίπου των -78 °C καθ' όλη τη διάρκεια της μεταφοράς. Κατά την παραλαβή, επιθεωρήστε αμέσως τον περιέκτη και μεταφέρετε τα φιαλίδια χωρίς καθυστέρηση στην κατάλληλη αποθήκη.

Στην Cytion, υποστηρίζουμε την ποιότητα και τη βιωσιμότητα των προϊόντων μας. Εγγυόμαστε ότι τα κύτταρά μας θα είναι βιώσιμα κατά την έναρξη της καλλιέργειας για 60 ημέρες μετά την αποστολή από τις εγκαταστάσεις μας. Διαβεβαιώνουμε ότι όλα τα υλικά συμμορφώνονται με τις προδιαγραφές που περιγράφονται στο Πιστοποιητικό Ανάλυσης ή/και στο Φύλλο Προϊόντος

Για πλήρεις λεπτομέρειες, ανατρέξτε στην <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Δήλωση εγγύησης