Skip to content
ACT-1
Tissue
היברידומה
Synonyms
Act I, ACT 1, ACT I

Documents

ACT-1

Cell line · Product number 305461

The ACT-1 cell line originates from a strain of the slime mold Dictyostelium discoideum, which serves as a valuable model for studying actin dynamics and ...

US$540.00excl. tax and shipping
In stock
Lot
Recommended (freshest lot)
  • CoA
1

01General information

Description

קו התאים ACT-1 מקורו בזן של הפטרייה הרירית Dictyostelium discoideum, המשמשת מודל חשוב לחקר הדינמיקה של האקטין והתנועה התאית. ב-Dictyostelium, האקטין ממלא תפקיד מרכזי בארגון שלד התא, במיוחד בתהליך הכימוטקסיס ובהתאגדות תאים בתנאי מחסור בחומרים מזינים. קו התאים ACT-1 היה חיוני לניתוח האינטראקציות של נוגדנים מונוקלונליים עם אקטין, במיוחד בהבחנה בין אזורי קישור ספציפיים על מונומרים של אקטין ובהערכת התגובות המבניות והתפקודיות של אקטין לאינטראקציות מולקולריות שונות. מחקרים שהשתמשו ב-ACT-1 תרמו באופן משמעותי להבנת האופן שבו אזורי הקצה האמינו-טרמינליים של האקטין מקיימים אינטראקציה עם נוגדנים ומשפיעים על פולימריזציית האקטין, תוך הדגשת אזורים חיוניים למעבר ממונומר לסיב ולייצובו.

בפרט, נעשה שימוש ב-ACT-1 לבחינת נוגדנים מונוקלונליים המסוגלים למנוע פולימריזציה של אקטין באמצעות קישור סלקטיבי לצורות המונומריות של אקטין. קישור זה מעכב את היווצרות הסיבים על ידי ייצוב האקטין במצבו המונומרי, מה שמפחית את אורך הסיבים ואת הצמיגות כאשר הוא מוחדר לסיבי אקטין קיימים. השפעות אלו מועילות לחקר חלבונים המווסתים את האקטין ומנגנוני פעולתם בתהליכים תאיים. לאור הספציפיות שלו, קו ה-ACT-1 מהווה כלי חיוני הן לניסויים ביוכימיים והן למחקרי אימונופלואורסצנציה, המשתמשים בנוגדנים מונוקלונליים נגד אקטין כדי למפות תחומים מבניים של האקטין ולהעריך את תפקידי הוויסות של חלבונים הנקשרים לאקטין בארכיטקטורה התאית.

Tissue
היברידומה
Synonyms
  • Act I
  • ACT 1
  • ACT I

02Classification

Organism
Mouse
Growth properties
Adherent
Biosafety level
1

03Characteristics

Morphology
דמוי לימפוציט
Cell type
תאי הטחול עברו מיזוג עם תאי מיאלומה מסוג NS-1

04Identifiers

Citation
ACT-1 (מספר קטלוג Cytion 305461)
NCBI TaxID
10090
Cellosaurus
CVCL_4499

05Expression and susceptibility

Protein expression
אימונוגלובולין מונוקלונלי (IgG1) נגד אקטין של Dictyostelium discoideum

06Handling and culture

Culture medium
RPMI 1640, w: 2.1 mM גלוטמין יציב, w: 2.0 g/L NaHCO3 (מספר פריט Cytion 820700a)
Incubation atmosphere

37°C, 5%CO2, אווירה לחה.

Supplements
הוסף לתווך 10% FBS
Dissociation reagent
אקוטאז
Subculturing
אסוף את תאי התרחיף בצינור של 15 מ"ל ושטוף בעדינות את התאים הנצמדים עם PBS ללא סידן ומגנזיום (השתמש ב-3-5 מ"ל עבור בקבוקי T25 ו-5-10 מ"ל עבור בקבוקי T75). החל Accutase (1-2 מ"ל עבור בקבוקי T25, 2.5 מ"ל עבור בקבוקי T75) תוך הקפדה על כיסוי מלא של שכבת התאים. אפשר לתאים להתפתח בטמפרטורת החדר למשך 10 דקות. לאחר ההתפתחות, שלב וצנטריפוג את התאים המרחפים והדבוקים. לאחר הצנטריפוגה, השב בזהירות את משקע התאים והעבר את תמיסת התאים לבקבוקים חדשים המכילים מדיום טרי.
Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Quality control and cryopreservation

Sterility

זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה.

כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.

Freeze medium
כמדיום לשימור בקירור, אנו משתמשים במדיום גידול מלא (כולל FBS) + 10% DMSO כדי להבטיח חיוניות נאותה לאחר ההפשרה, או CM-1 (מספר קטלוגי Cytion 800100), הכולל חומרים אוסמו-מגנים ומייצבי מטבוליזם משופרים כדי לשפר את ההתאוששות ולהפחית את הלחץ הנגרם מהקפאה.
Storage conditions

לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

Shipping conditions

שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.