Przejdź do treści
ACT-1
Chusteczka
Hybrydoma
Synonimy
Act I, ACT 1, ACT I

Dokumenty

ACT-1

Cell line · Numer produktu 305461

The ACT-1 cell line originates from a strain of the slime mold Dictyostelium discoideum, which serves as a valuable model for studying actin dynamics and ...

€550.00bez podatku i kosztów wysyłki
W magazynie
Lot
Polecane (najświeższa partia)
  • CoA
1

01Informacje ogólne

Opis

Linia komórkowa ACT-1 pochodzi ze szczepu śluzowca Dictyostelium discoideum, który stanowi cenny model do badania dynamiki aktyny i ruchliwości komórkowej. W Dictyostelium aktyna odgrywa kluczową rolę w organizacji cytoszkieletu, szczególnie w procesie chemotaksji i agregacji komórek w warunkach niedoboru składników odżywczych. Linia komórkowa ACT-1 okazała się niezbędna do analizy interakcji przeciwciał monoklonalnych z aktyną, zwłaszcza w rozróżnianiu specyficznych regionów wiązania na monomerach aktyny oraz w ocenie strukturalnych i funkcjonalnych reakcji aktyny na różne interakcje molekularne. Badania z wykorzystaniem linii ACT-1 w znacznym stopniu przyczyniły się do zrozumienia, w jaki sposób regiony amino-końcowe aktyny oddziałują z przeciwciałami i wpływają na polimeryzację aktyny, wskazując regiony kluczowe dla przejścia z postaci monomerowej do włóknistej oraz dla stabilizacji włókien.

W szczególności linia ACT-1 została wykorzystana do badania przeciwciał monoklonalnych, które mogą zapobiegać polimeryzacji aktyny poprzez selektywne wiązanie się z jej formami monomerycznymi. Wiązanie to hamuje tworzenie włókien poprzez stabilizację aktyny w stanie monomerycznym, co zmniejsza długość włókien i lepkość po wprowadzeniu do istniejących włókien aktynowych. Efekty te są przydatne w badaniu białek regulujących aktynę oraz ich mechanizmów działania w procesach komórkowych. Ze względu na swoją specyficzność linia ACT-1 odgrywa kluczową rolę zarówno w testach biochemicznych, jak i badaniach immunofluorescencyjnych, w których wykorzystuje się przeciwciała monoklonalne przeciwko aktynie do mapowania strukturalnych domen aktyny oraz oceny roli regulacyjnej białek wiążących aktynę w architekturze komórkowej.

Chusteczka
Hybrydoma
Synonimy
  • Act I
  • ACT 1
  • ACT I

02Klasyfikacja

Organizm
Mysz
Właściwości związane ze wzrostem
Zwolennik
Poziom bezpieczeństwa biologicznego
1

03Cechy charakterystyczne

Morfologia
Podobne do limfoblastów
Typ komórki
Komórki śledziony poddano fuzji z komórkami szpiczaka NS-1

04Identyfikatory

Źródło
ACT-1 (numer katalogowy Cytion 305461)
Numer identyfikacji podatkowej NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_4499

05Ekspresja i podatność

Ekspresja białek
Immunoglobulina monoklonalna (IgG1) skierowana przeciwko aktynom Dictyostelium discoideum

06Postępowanie i hodowla

Pożywka hodowlana
RPMI 1640, w: 2,1 mM stabilnej glutaminy, w: 2,0 g/L NaHCO3 (numer artykułu Cytion 820700a)
Atmosfera inkubacyjna

37°C, 5%CO2, nawilżona atmosfera.

Suplementy
Uzupełnić podłoże 10% FBS
Odczynnik dysocjacyjny
Accutase
Hodowla komórek w subkulturze
Zebrać komórki zawiesiny do probówki o pojemności 15 ml i delikatnie przemyć przylegające komórki PBS pozbawionym wapnia i magnezu (użyć 3-5 ml dla kolb T25 i 5-10 ml dla kolb T75). Nałożyć Accutase (1-2 ml na kolby T25, 2,5 ml na kolby T75), zapewniając pełne pokrycie warstwy komórek. Pozostawić komórki do inkubacji w temperaturze pokojowej przez 10 minut. Po inkubacji połączyć i odwirować zarówno zawiesinę, jak i przylegające komórki. Po odwirowaniu ostrożnie zawiesić osad komórek i przenieść zawiesinę komórek do nowych kolb zawierających świeżą pożywkę.
Rozmrażanie i hodowla
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola jakości i kriokonserwacja

Bezpłodność

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

Pożywka do zamrażania
Jako pożywki do kriokonserwacji używamy kompletnej pożywki wzrostowej (w tym FBS) + 10% DMSO w celu zapewnienia odpowiedniej żywotności po rozmrożeniu lub CM-1 (numer katalogowy Cytion 800100), która zawiera zoptymalizowane osmoprotektanty i stabilizatory metaboliczne w celu zwiększenia regeneracji i zmniejszenia stresu wywołanego kriokonserwacją.
Warunki przechowywania

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Warunki wysyłki

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.