Ga naar de inhoud
ACT-1
Weefsel
Hybridoma
Synoniemen
Act I, ACT 1, ACT I

Documenten

ACT-1

Cell line · Productnummer 305461

The ACT-1 cell line originates from a strain of the slime mold Dictyostelium discoideum, which serves as a valuable model for studying actin dynamics and ...

€550.00excl. btw en verzendkosten

Maatwerk / Aanbevelingen

Op voorraad
Lot
Aanbevolen (verste partij)
  • CoA
1

01Algemene informatie

Beschrijving

De ACT-1-cellijn is afkomstig van een stam van de slijmzwam Dictyostelium discoideum, die als een waardevol model dient voor het bestuderen van actinedynamica en cellulaire motiliteit. Bij Dictyostelium speelt actine een cruciale rol in de organisatie van het cytoskelet, met name bij het proces van chemotaxis en cellulaire aggregatie bij een tekort aan voedingsstoffen. De ACT-1-cellijn is van essentieel belang geweest voor het analyseren van interacties tussen monoklonale antilichamen en actine, met name bij het onderscheiden van specifieke bindingsregio’s op actinemonomeren en het beoordelen van de structurele en functionele reacties van actine op diverse moleculaire interacties. Onderzoek met behulp van ACT-1 heeft aanzienlijk bijgedragen aan het inzicht in hoe de amino-terminale regio’s van actine interageren met antilichamen en de polymerisatie van actine beïnvloeden, waarbij regio’s werden belicht die cruciaal zijn voor de overgang van monomeer naar filament en voor stabilisatie.

ACT-1 is met name gebruikt voor het onderzoeken van monoklonale antilichamen die de actinepolymerisatie kunnen verhinderen door selectief te binden aan monomere vormen van actine. Deze binding remt de filamentvorming door actine in zijn monomere toestand te stabiliseren, wat de filamentlengte en viscositeit vermindert wanneer het wordt toegevoegd aan bestaande actinefilamenten. Deze effecten zijn nuttig voor het bestuderen van actine-regulerende eiwitten en hun mechanismen in cellulaire processen. Gezien de specificiteit ervan is de ACT-1-lijn van groot belang voor zowel biochemische assays als immunofluorescentieonderzoeken, waarbij monoklonale anti-actine-antilichamen worden gebruikt om structurele actinedomeinen in kaart te brengen en de regulerende rol van actinebindende eiwitten in de cellulaire architectuur te beoordelen.

Weefsel
Hybridoma
Synoniemen
  • Act I
  • ACT 1
  • ACT I

02Classificatie

Organisme
Muis
Groei-eigenschappen
Aanhanger
Bioveiligheidsniveau
1

03Kenmerken

Morfologie
Lymfoblast-achtig
Celtype
Miltcellen werden gefuseerd met NS-1-myeloomcellen

04Identificatiegegevens

Bronvermelding
ACT-1 (Cytion-catalogusnummer 305461)
NCBI-belastingnummer
10090
Cellosaurus
CVCL_4499

05Expressie en vatbaarheid

Eiwit-expressie
Monoklonaal immunoglobuline (IgG1) tegen de actines van Dictyostelium discoideum

06Behandeling en kweek

Kweekmedium
RPMI 1640, w: 2,1 mM stabiele Glutamine, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion artikelnummer 820700a)
Incubatieomgeving

37°C, 5%CO2, bevochtigde atmosfeer.

Supplementen
Vul het medium aan met 10% FBS
Dissociatiereagens
Accutase
Heruitplanten
Verzamel de suspensiecellen in een buis van 15 ml en was de aanhangende cellen voorzichtig met PBS zonder calcium en magnesium (gebruik 3-5 ml voor T25-flesjes en 5-10 ml voor T75-flesjes). Breng Accutase aan (1-2 ml voor T25-flesjes, 2,5 ml voor T75-flesjes) en zorg dat de cellaag volledig bedekt wordt. Laat de cellen 10 minuten bij kamertemperatuur incuberen. Na de incubatie zowel de suspensie als de aanhangende cellen combineren en centrifugeren. Na het centrifugeren de celpellet voorzichtig resuspenderen en de celsuspensie overbrengen in nieuwe kolven met vers medium.
Ontdooien en kweken
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kwaliteitscontrole en cryopreservatie

Onvruchtbaarheid

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.

Kweekmedium invriezen
Als cryoconserveringsmedium gebruiken we volledig groeimedium (inclusief FBS) + 10% DMSO voor voldoende levensvatbaarheid na het ontdooien, of CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100), dat geoptimaliseerde osmoprotectanten en metabolische stabilisatoren bevat om het herstel te verbeteren en door cryo geïnduceerde stress te verminderen.
Opslagvoorwaarden

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Verzendvoorwaarden

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.