Siirry sisältöön
ACT-1
Kudos
Hybridoma
Synonyymit
Act I, ACT 1, ACT I

Asiakirjat

ACT-1

Cell line · Tuotenumero 305461

The ACT-1 cell line originates from a strain of the slime mold Dictyostelium discoideum, which serves as a valuable model for studying actin dynamics and ...

€550.00ilman veroja ja toimituskuluja
Varastossa
Lot
Suositeltava (tuorein erä)
  • CoA
1

01Yleistä tietoa

Kuvaus

ACT-1-solulinja on peräisin limasienen Dictyostelium discoideum -kannasta, joka toimii arvokkaana mallina aktiinin dynamiikan ja solujen liikkuvuuden tutkimuksessa. Dictyosteliumissa aktiini on keskeisessä roolissa solukon rakenteessa, erityisesti kemotaksisprosessissa ja solujen aggregaatiossa ravinteiden puutteen vallitessa. ACT-1-solulinja on ollut välttämätön monoklonaalisten vasta-aineiden ja aktiinin välisten vuorovaikutusten analysoinnissa, erityisesti aktiinimonomereiden spesifisten sitoutumisalueiden erottelussa sekä aktiinin rakenteellisten ja toiminnallisten reaktioiden arvioinnissa erilaisiin molekyylivuorovaikutuksiin. ACT-1:tä hyödyntävät tutkimukset ovat edistäneet merkittävästi ymmärrystä siitä, miten aktiinin aminoterminaaliset alueet vuorovaikuttavat vasta-aineiden kanssa ja vaikuttavat aktiinin polymeroitumiseen, korostaen alueita, jotka ovat ratkaisevia monomeerista filamentiksi tapahtuvassa siirtymässä ja stabiloinnissa.

Erityisesti ACT-1:tä on käytetty tutkimaan monoklonaalisia vasta-aineita, jotka voivat estää aktiinin polymeroitumisen sitoutumalla selektiivisesti aktiinin monomeerimuotoihin. Tämä sitoutuminen estää filamenttien muodostumista stabiloimalla aktiinin monomeerisessa tilassaan, mikä lyhentää filamenttien pituutta ja vähentää viskositeettia, kun vasta-ainetta lisätään olemassa oleviin aktiinifilamentteihin. Nämä vaikutukset ovat hyödyllisiä aktiinia säätelevien proteiinien ja niiden mekanismien tutkimisessa soluprosesseissa. Spesifisyytensä ansiosta ACT-1-kanta on keskeinen sekä biokemiallisissa määrityksissä että immunofluoresenssitutkimuksissa, joissa hyödynnetään anti-aktinimonoklonaalisia vasta-aineita aktiinin rakenteellisten domeenien kartoittamiseen ja aktiiniin sitoutuvien proteiinien säätelevien roolien arviointiin solurakenteessa.

Kudos
Hybridoma
Synonyymit
  • Act I
  • ACT 1
  • ACT I

02Luokittelu

Organismi
Hiiri
Kasvuominaisuudet
Kiinnittynyt
Bioturvallisuustaso
1

03Ominaisuudet

Morfologia
Lymfoblastien kaltaiset
Solutyyppi
Pernasolut fuusioitiin NS-1-myeloomasolujen kanssa

04Tunnisteet

Lähdeviite
ACT-1 (Cytionin tuotenumero 305461)
NCBI-verotunnus
10090
Cellosaurus
CVCL_4499

05Ilmentyminen ja alttius

Proteiinin ilmentyminen
Dictyostelium discoideumin aktiineja vastaan suunnattu monoklonaalinen immunoglobuliini (IgG1)

06Käsittely ja viljely

Viljelyalusta
RPMI 1640, w: 2,1 mM stabiilia glutamiinia, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytionin artikkelinumero 820700a)
Inkubaatioilma

37 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä.

Ravintolisät
Täydennetään elatusainetta 10 %:lla FBS:llä
Dissosiaatioreagenssi
Accutase
Soluviljely
Kerää suspensiosolut 15 ml:n putkeen ja pese kiinni olevat solut varovasti PBS:llä, josta puuttuu kalsiumia ja magnesiumia (3-5 ml T25-pulloissa ja 5-10 ml T75-pulloissa). Levitä Accutasea (1-2 ml T25-pulloihin, 2,5 ml T75-pulloihin) varmistaen, että solukerros peittyy kokonaan. Anna solujen inkuboitua huoneenlämmössä 10 minuuttia. Inkuboinnin jälkeen yhdistetään ja sentrifugoidaan sekä suspensio että adherentit solut. Sentrifugoinnin jälkeen solupelletti suspendoidaan varovasti uudelleen ja siirretään solususpensio uusiin pulloihin, jotka sisältävät tuoretta väliaineita.
Sulatus ja viljely
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Laadunvalvonta ja kryosäilytys

Hedelmättömyys

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Jäädytysaine
Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa (mukaan lukien FBS) + 10 % DMSO:ta riittävän sulatuksen jälkeisen elinkelpoisuuden varmistamiseksi tai CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytyksen aiheuttamaa stressiä.
Säilytysolosuhteet

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Toimitusehdot

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.