Mine otse sisu juurde
ACT-1
Kude
Hybridoma
Sünonüümid
Act I, ACT 1, ACT I

Dokumendid

ACT-1

Cell line · Toote number 305461

The ACT-1 cell line originates from a strain of the slime mold Dictyostelium discoideum, which serves as a valuable model for studying actin dynamics and ...

€550.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta
Laos
Lot
Soovitatav (värskeim partii)
  • CoA
1

01Üldine teave

Kirjeldus

ACT-1 rakuliin pärineb limaseene Dictyostelium discoideum tüvest, mis on väärtuslik mudel aktiini dünaamika ja rakkude liikuvuse uurimiseks. Dictyosteliumis mängib aktiin keskset rolli tsütoskeleti korralduses, eriti kemotaksise protsessis ja rakkude koondumisel toitainete puuduse korral. ACT-1 rakuliin on olnud hädavajalik monoklonaalsete antikehade ja aktiini vastastikmõju analüüsimisel, eriti aktiini monomeeride spetsiifiliste seondumispiirkondade eristamisel ning aktiini struktuuriliste ja funktsionaalsete reaktsioonide hindamisel erinevate molekulaarsete vastastikmõjude suhtes. ACT-1-l põhinevad uuringud on oluliselt aidanud mõista, kuidas aktiini aminoterminaalsed piirkonnad antikehadega interakteeruvad ja mõjutavad aktiini polümerisatsiooni, tuues esile piirkonnad, mis on otsustava tähtsusega monomeeride filamentideks muutumisel ja stabiliseerumisel.

Eelkõige on ACT-1-i kasutatud selliste monoklonaalsete antikehade uurimiseks, mis suudavad takistada aktiini polümerisatsiooni, seondudes selektiivselt aktiini monomeersete vormidega. See seondumine pärsib filamentide moodustumist, stabiliseerides aktiini monomeerses olekus, mis vähendab filamentide pikkust ja viskoossust, kui seda lisatakse olemasolevatele aktiini filamentidele. Need mõjud on kasulikud aktiini reguleerivate valkude ja nende mehhanismide uurimiseks rakulistes protsessides. Arvestades selle spetsiifilisust, on ACT-1 liin oluline nii biokeemiliste analüüside kui ka immunofluorestsentsuuringute jaoks, milles kasutatakse anti-aktini monoklonaalseid antikehi aktiini struktuuriliste domeenide kaardistamiseks ja aktiiniga seonduvate valkude regulatiivse rolli hindamiseks rakuarhitektuuris.

Kude
Hybridoma
Sünonüümid
  • Act I
  • ACT 1
  • ACT I

02Klassifikatsioon

Organism
Hiir
Kasvuvõime
Järgija
Bioloogilise ohutuse tase
1

03Omadused

Morfoloogia
Lümfoblastilaadsed
Rakutüüp
Põrna rakud ühendati NS-1 müeloomirakkudega

04Tunnused

Viide
ACT-1 (Cytioni katalooginumber 305461)
NCBI maksukood
10090
Cellosaurus
CVCL_4499

05Avaldumine ja vastuvõtlikkus

Valgu ekspressioon
Dictyostelium discoideumi aktiinide vastu suunatud monoklonaalne immunoglobuliin (IgG1)

06Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
RPMI 1640, w: 2,1 mM stabiilne glutamiin, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytioni artikli number 820700a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Täiendada söötme 10% FBS-ga
Dissotsiatsioonireaktiiv
Accutase
Kultuuri edasikasvatamine
Koguge suspensioonirakud 15 ml tuubi ja peske kleepunud rakud ettevaatlikult PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium (kasutage 3-5 ml T25 kolbide puhul ja 5-10 ml T75 kolbide puhul). Kandke Accutase'i (1-2 ml T25 kolvidesse, 2,5 ml T75 kolvidesse), tagades rakukihi täieliku katvuse. Laske rakkudel 10 minutit toatemperatuuril inkubeerida. Pärast inkubeerimist ühendage ja tsentrifuugige nii suspensioon kui ka adherentsed rakud. Pärast tsentrifuugimist resuspendeerige rakupellet ettevaatlikult ja kandke rakususpensioon uutesse kolvidesse, mis sisaldavad värsket söötmeainet.
Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.