Pāriet uz saturu
ACT-1
Audums
Hybridoma
Sinonīmi
Act I, ACT 1, ACT I

Dokumenti

ACT-1

Cell line · Preces numurs 305461

The ACT-1 cell line originates from a strain of the slime mold Dictyostelium discoideum, which serves as a valuable model for studying actin dynamics and ...

€550.00bez nodokļa un piegādes izmaksām

Pielāgošana / Ieteikumi

Noliktavā
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
  • CoA
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

ACT-1 šūnu līnija ir iegūta no gļotpelējuma Dictyostelium discoideum celma, kas kalpo kā vērtīgs modelis aktīna dinamikas un šūnu kustīguma pētīšanai. Dictyostelium aktīnam ir izšķiroša loma citoskeleta organizācijā, jo īpaši hemotakses procesā un šūnu agregācijā barības vielu trūkuma apstākļos. ACT-1 šūnu līnija ir bijusi būtiska monoklonālo antivielu mijiedarbības ar aktīnu analīzē, jo īpaši, lai atšķirtu specifiskas saistīšanās zonas uz aktīna monomēriem un novērtētu aktīna strukturālās un funkcionālās reakcijas uz dažādām molekulārām mijiedarbībām. Pētījumi, kuros izmantota ACT-1, ir ievērojami veicinājuši izpratni par to, kā aktīna aminoskābes terminālās reģionu mijiedarbojas ar antivielām un ietekmē aktīna polimerizāciju, izceļot reģionus, kas ir būtiski monomēru pārejai filamentos un to stabilizācijai.

Jo īpaši ACT-1 ir izmantota, lai pētītu monoklonālās antivielas, kas var novērst aktīna polimerizāciju, selektīvi saistoties ar aktīna monomēru formām. Šī saistīšanās kavē filamentu veidošanos, stabilizējot aktīnu tā monomērā stāvoklī, kas samazina filamentu garumu un viskozitāti, tos ievadot esošajos aktīna filamentos. Šie efekti ir noderīgi, pētot aktīnu regulējošos proteīnus un to darbības mehānismus šūnu procesos. Ņemot vērā tās specifiskumu, ACT-1 līnija ir būtiska gan bioķīmiskajos testos, gan imunofluorescences pētījumos, kuros izmanto anti-aktīna monoklonālās antivielas, lai kartētu aktīna strukturālās domēnas un novērtētu aktīnu saistošo proteīnu regulējošo lomu šūnu arhitektūrā.

Audums
Hybridoma
Sinonīmi
  • Act I
  • ACT 1
  • ACT I

02Klasifikācija

Organisms
Pele
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Limfoblastiem līdzīgs
Šūnu tips
Liesas šūnas tika sapludinātas ar NS-1 mielomas šūnām

04Identifikatori

Atsauce
ACT-1 (Cytion kataloga numurs 305461)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
10090
Cellosaurus
CVCL_4499

05Pazīmes un uzņēmība

Proteīnu ekspresija
Monoklonālais imūnglobulīns (IgG1) pret Dictyostelium discoideum aktīniem

06Apstrāde un audzēšana

Barotne
RPMI 1640, w: 2,1 mM stabils glutamīns, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion izstrādājuma numurs 820700a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildināt barotni ar 10% FBS
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Savāc suspensijas šūnas 15 ml mēģenē un saudzīgi izmazgā pielipušās šūnas ar PBS bez kalcija un magnija (T25 kolbām izmanto 3-5 ml, bet T75 kolbām - 5-10 ml). Uzklājiet Accutase (1-2 ml T25 kolbām, 2,5 ml T75 kolbām), nodrošinot pilnīgu šūnu slāņa pārklājumu. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 10 minūtes. Pēc inkubācijas apvienot un centrifugēt gan suspensiju, gan pielipušās šūnas. Pēc centrifugēšanas uzmanīgi resuspendēt šūnu granulas un pārvietot šūnu suspensiju jaunās kolbās ar svaigu barotni.
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.