Tartalomra ugrás
ACT-1
Szövet
Hybridoma
Szinonimák
Act I, ACT 1, ACT I

Dokumentumok

ACT-1

Cell line · Termékszám 305461

The ACT-1 cell line originates from a strain of the slime mold Dictyostelium discoideum, which serves as a valuable model for studying actin dynamics and ...

€550.00adó és szállítási költség nélkül

Személyre szabás / Ajánlások

Raktáron van
Lot
Ajánlott (a legfrissebb tétel)
  • CoA
1

01Általános információk

Leírás

Az ACT-1 sejtvonal a Dictyostelium discoideum nyálkagomba egyik törzséből származik, amely értékes modellként szolgál az aktin dinamikájának és a sejtek mozgékonyságának vizsgálatához. A Dictyosteliumban az aktin kulcsfontosságú szerepet játszik a citoszkeleton szerveződésében, különösen a kemotaxis folyamatában és a tápanyaghiány miatti sejtaggregációban. Az ACT-1 sejtvonal elengedhetetlen volt a monoklonális antitestek és az aktin közötti kölcsönhatások elemzéséhez, különösen az aktin-monomerek specifikus kötődési régióinak megkülönböztetésében, valamint az aktin szerkezeti és funkcionális válaszainak értékelésében különböző molekuláris kölcsönhatásokra. Az ACT-1-et felhasználó tanulmányok jelentősen hozzájárultak annak megértéséhez, hogy az aktin aminoterminális régiói hogyan lépnek kölcsönhatásba az antitestekkel és hogyan befolyásolják az aktin polimerizációját, kiemelve a monomerből filamentummá történő átalakuláshoz és a stabilizációhoz elengedhetetlen régiókat.

Az ACT-1-et különösen olyan monoklonális antitestek vizsgálatára használták, amelyek az aktin monomer formáihoz való szelektív kötődés révén megakadályozzák az aktin polimerizációját. Ez a kötődés az aktint monomer állapotában stabilizálva gátolja a filamentumok kialakulását, ami a már meglévő aktin-filamentumokba juttatva csökkenti azok hosszát és viszkozitását. Ezek a hatások hasznosak az aktint szabályozó fehérjék és azok sejtes folyamatokban betöltött szerepének vizsgálatához. Specifikusságának köszönhetően az ACT-1 vonal kulcsfontosságú szerepet játszik mind a biokémiai vizsgálatokban, mind az immunfluoreszcencia-vizsgálatokban, amelyek anti-aktin monoklonális antitesteket használnak az aktin szerkezeti doménjeinek feltérképezésére, valamint az aktinhoz kötődő fehérjék sejtarchitektúrában betöltött szabályozó szerepének értékelésére.

Szövet
Hybridoma
Szinonimák
  • Act I
  • ACT 1
  • ACT I

02Osztályozás

Organizmus
Egér
Növekedési tulajdonságok
Hűséges
Biológiai biztonsági szint
1

03Jellemzők

Morfológia
Limfoblaszt-szerű
Sejttípus
A lépsejteket NS-1 mielóma sejtekkel fúzionáltuk

04Azonosítók

Hivatkozás
ACT-1 (Cytion katalógusszám: 305461)
NCBI adóazonosító szám
10090
Cellosaurus
CVCL_4499

05Kifejeződés és fogékonyság

Fehérjeexpresszió
A Dictyostelium discoideum aktinjai ellen irányuló monoklonális immunglobulin (IgG1)

06Kezelés és tenyésztés

Táptalaj
RPMI 1640, w: 2,1 mM stabil glutamin, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion cikkszám 820700a)
Inkubációs környezet

37°C, 5%CO2, párásított légkör.

Kiegészítők
A táptalajt egészítsük ki 10% FBS-szel
Diszociációs reagens
Accutase
Átültetés
Gyűjtse össze a szuszpenziós sejteket egy 15 ml-es csőbe, és óvatosan mossa át a megtapadt sejteket kalciumot és magnéziumot nem tartalmazó PBS-szel (T25 lombik esetén 3-5 ml-t, T75 lombik esetén 5-10 ml-t használjon). Vigyen fel Accutase-t (1-2 ml-t T25 lombikokhoz, 2,5 ml-t T75 lombikokhoz), biztosítva a sejtréteg teljes lefedettségét. Hagyjuk a sejteket 10 percig szobahőmérsékleten inkubálni. Az inkubációt követően egyesítsük és centrifugáljuk a szuszpenziót és az adhezív sejteket. A centrifugálás után óvatosan reszuszpendáljuk a sejtpelletet, és a sejtszuszpenziót helyezzük át friss tápfolyadékot tartalmazó új lombikokba.
Felolvasztás és tenyésztés
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Minőségellenőrzés és kriokonzerválás

Meddőség

A mikoplazma-szennyeződést mind a PCR-alapú vizsgálatokkal, mind a lumineszcencia-alapú mikoplazma-kimutatási módszerekkel kizárják.

A bakteriális, gombás vagy élesztőgombás szennyeződés elkerülése érdekében a sejtkultúrákat napi vizuális ellenőrzésnek vetik alá.

Fagyasztóközeg
Krioprezerváló táptalajként teljes növekedési táptalajt (beleértve az FBS-t) + 10% DMSO-t használunk a megfelelő kiolvasztás utáni életképesség érdekében, vagy CM-1-et (Cytion katalógusszám: 800100), amely optimalizált ozmoprotektánsokat és metabolikus stabilizátorokat tartalmaz a regenerálódás fokozása és a krio-indukált stressz csökkentése érdekében.
Tárolási feltételek

Hosszú távú tartósítás céljából helyezze az üvegeket gőzfázisú folyékony nitrogénbe, körülbelül -150 és -196 °C közötti hőmérsékleten. A -80 °C-on történő tárolás csak rövid átmeneti lépésként fogadható el a folyékony nitrogénbe való átvitel előtt.

Szállítási feltételek

A kriokonzervált sejtvonalakat szárazjégen, validált, szigetelt csomagolásban szállítják, elegendő hűtőközeggel, hogy a szállítás során a hőmérsékletet körülbelül -78 °C-on tartsák. Átvételkor azonnal vizsgálja meg a tárolóedényt, és haladéktalanul helyezze át az injekciós üvegeket a megfelelő tárolóhelyre.