Skip to content
ACT-1
Tissue
ไฮบริโดมา
Synonyms
Act I, ACT 1, ACT I

Documents

ACT-1

Cell line · Product number 305461

The ACT-1 cell line originates from a strain of the slime mold Dictyostelium discoideum, which serves as a valuable model for studying actin dynamics and ...

€550.00excl. tax and shipping

Customization / Recommendations

In stock
Lot
Recommended (freshest lot)
  • CoA
1

01General information

Description

สายเซลล์ ACT-1 มีต้นกำเนิดจากสายพันธุ์ของเชื้อราเมือก Dictyostelium discoideum ซึ่งถือเป็นแบบจำลองที่มีค่าในการศึกษาพลวัตของแอคตินและการเคลื่อนไหวของเซลล์ ใน Dictyostelium แอคตินมีบทบาทสำคัญในการจัดโครงสร้างโครงร่างเซลล์ โดยเฉพาะอย่างยิ่งในกระบวนการเคโมแทกซิสและการรวมตัวของเซลล์เมื่อขาดสารอาหาร สายเซลล์ ACT-1 มีบทบาทสำคัญในการวิเคราะห์ปฏิสัมพันธ์ระหว่างแอนติบอดีโมโนโคลนัลกับแอคติน โดยเฉพาะอย่างยิ่งในการแยกแยะบริเวณการจับที่เฉพาะเจาะจงบนโมโนเมอร์แอคติน และการประเมินการตอบสนองทางโครงสร้างและหน้าที่ของแอคตินต่อปฏิสัมพันธ์โมเลกุลต่าง ๆ การศึกษาโดยใช้ ACT-1 ได้มีส่วนสำคัญในการเข้าใจว่าบริเวณปลายอะมิโนของแอคตินมีปฏิสัมพันธ์กับแอนติบอดีอย่างไร และส่งผลต่อการพอลิเมอไรเซชันของแอคตินอย่างไร โดยเน้นย้ำถึงบริเวณที่สำคัญต่อการเปลี่ยนผ่านจากโมโนเมอร์เป็นฟิลามีนต์และการทำให้เสถียร

โดยเฉพาะอย่างยิ่ง ACT-1 ได้ถูกใช้เพื่อศึกษาแอนติบอดีโมโนโคลนอลที่สามารถป้องกันการโพลีเมอไรเซชันของแอคตินได้โดยการจับกับรูปแบบโมโนเมอร์ของแอคตินอย่างเลือกสรร การจับนี้ยับยั้งการก่อตัวของฟิลามีนต์โดยการทำให้แอคตินคงตัวในสถานะโมโนเมอร์ ซึ่งช่วยลดความยาวและความหนืดของฟิลามีนต์เมื่อถูกนำเข้าสู่ฟิลามีนต์แอคตินที่มีอยู่ ผลเหล่านี้มีประโยชน์ในการศึกษาโปรตีนที่ควบคุมแอคตินและกลไกการทำงานของมันในกระบวนการเซลล์ ด้วยความจำเพาะของมัน สาย ACT-1 จึงมีบทบาทสำคัญทั้งในการทดสอบทางชีวเคมีและการศึกษาด้วยวิธีอิมมูโนฟลูออเรสเซนซ์ ซึ่งใช้แอนติบอดีโมโนโคลนัลต่อต้านแอคตินเพื่อกำหนดตำแหน่งโดเมนโครงสร้างของแอคติน และประเมินบทบาทการควบคุมของโปรตีนที่จับกับแอคตินในโครงสร้างเซลล์

Tissue
ไฮบริโดมา
Synonyms
  • Act I
  • ACT 1
  • ACT I

02Classification

Organism
Mouse
Growth properties
Adherent
Biosafety level
1

03Characteristics

Morphology
ลักษณะคล้ายลิมโฟบลาสต์
Cell type
เซลล์ม้ามได้ถูกรวมกับเซลล์ไมอีโลมา NS-1

04Identifiers

Citation
ACT-1 (หมายเลขแคตตาล็อก Cytion 305461)
NCBI TaxID
10090
Cellosaurus
CVCL_4499

05Expression and susceptibility

Protein expression
อิมมูโนโกลบูลินโมโนโคลนัล (IgG1) ที่ต่อต้านแอคตินของ Dictyostelium discoideum

06Handling and culture

Culture medium
RPMI 1640, w: 2.1 mM กลูตามีนเสถียร, w: 2.0 กรัม/ลิตร NaHCO3 (หมายเลขบทความ Cytion 820700a)
Incubation atmosphere

37°C, 5%CO2, บรรยากาศชื้น

Supplements
เติมอาหารเลี้ยงเชื้อด้วย FBS 10%
Dissociation reagent
แอคคูเทส
Subculturing
รวบรวมเซลล์ที่ลอยในหลอดขนาด 15 มิลลิลิตร และล้างเซลล์ที่ติดผนังอย่างเบามือด้วย PBS ที่ไม่มีแคลเซียมและแมกนีเซียม (ใช้ 3-5 มิลลิลิตรสำหรับขวด T25 และ 5-10 มิลลิลิตรสำหรับขวด T75)นำ Accutase (1-2 มล. สำหรับขวด T25, 2.5 มล. สำหรับขวด T75) ใส่ให้ทั่วชั้นเซลล์อย่างทั่วถึง ปล่อยให้เซลล์พักที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 10 นาที หลังจากนั้นรวมและปั่นเหวี่ยงทั้งเซลล์แขวนลอยและเซลล์ที่เกาะติด หลังจากปั่นเหวี่ยงแล้ว ให้นำเซลล์ที่ตกตะกอนมาแขวนลอยอย่างระมัดระวังและถ่ายเซลล์แขวนลอยไปยังขวดใหม่ที่มีอาหารเลี้ยงเซลล์สด
Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Quality control and cryopreservation

Sterility

การปนเปื้อนของไมโคพลาสมาถูกตัดออกโดยใช้ทั้งการทดสอบแบบ PCR และการตรวจหาไมโคพลาสมาโดยใช้วิธีการเรืองแสง

เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีการปนเปื้อนของแบคทีเรีย เชื้อรา หรือยีสต์ การเพาะเลี้ยงเซลล์จะถูกตรวจสอบด้วยสายตาทุกวัน

Freeze medium
ในฐานะที่เป็นสารอาหารสำหรับการแช่แข็ง เราใช้สารอาหารสำหรับการเจริญเติบโตแบบครบถ้วน (รวมถึง FBS) + 10% DMSO เพื่อความมีชีวิตหลังการละลายที่เพียงพอ หรือ CM-1 (หมายเลขแคตตาล็อก Cytion 800100) ซึ่งรวมถึงสารป้องกันออสโมติกและสารรักษาเสถียรภาพเมตาบอลิซึมที่ได้รับการปรับให้เหมาะสมเพื่อเพิ่มการฟื้นตัวและลดความเครียดที่เกิดจากการแช่แข็ง
Storage conditions

สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ให้วางหลอดบรรจุในไนโตรเจนเหลวในสถานะไอที่อุณหภูมิประมาณ −150 ถึง −196 °C การเก็บรักษาที่อุณหภูมิ −80 °C สามารถใช้ได้เฉพาะในระยะสั้นก่อนการย้ายไปยังไนโตรเจนเหลวเท่านั้น

Shipping conditions

เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า