NCI-H1299

A NCI-H1299, também conhecida como H1299, é uma linhagem celular humana de câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC) estabelecida a partir de uma metástase em linfonodo derivada de um paciente adulto do sexo masculino com carcinoma pulmonar. Juntamente com as células H292, a H1299 é amplamente utilizada como modelo de NSCLC em pesquisas de biologia do câncer e imuno-oncologia. A linhagem celular apresenta uma morfologia de tipo epitelial, caracterizada por células aderentes e achatadas, com espessura inferior a 5 µm e um tempo de duplicação aproximado de 22 a 30 horas. As células H1299 expressam queratina e vimentina, mas são negativas para a proteína triplete de neurofilamentos, refletindo um fenótipo com características tanto epiteliais quanto mesenquimais.

Geneticamente, as células H1299 apresentam uma deleção parcial homozigótica no gene TP53, resultando na perda completa da expressão da proteína p53. A linhagem também é caracterizada pelo status KRAS do tipo selvagem, o que a distingue de outros modelos de NSCLC, como as células A549, que portam mutações endógenas no KRAS. Devido à ausência de sinalização funcional de p53, combinada com o KRAS intacto, as células H1299 são frequentemente utilizadas para estudar a biologia dos supressores tumorais, vias de sinalização oncogênicas, apoptose, metástase e mecanismos de resistência terapêutica. Em comparação com linhagens celulares de NSCLC mais epiteliais, como a A549, as células H1299 apresentam um fenótipo mais mesenquimal, com expressão reduzida de marcadores epiteliais, o que as torna particularmente úteis para investigações sobre a transição epitelial-mesenquimal (EMT), invasão e progressão metastática.

Também foi relatado que as células H1299 sintetizam o neuropeptídeo neuromedina B (NMB) em baixos níveis, ao mesmo tempo em que não apresentam produção detectável do peptídeo liberador de gastrina (GRP). Suas características de crescimento robusto, alta transfectabilidade e perfil molecular bem caracterizado contribuíram para seu amplo uso em estudos envolvendo terapias direcionadas, edição genética, citotoxicidade imunomediada e vias de sinalização a jusante associadas ao KRAS. Assim como em todos os modelos de células tumorais cultivadas a longo prazo, recomenda-se a autenticação periódica e a confirmação das principais características moleculares para garantir a reprodutibilidade experimental.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.