NCI-H3122

A linhagem celular NCI-H3122 é derivada do câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC) e é caracterizada pela presença do gene de fusão EML4-ALK, que resulta de uma translocação cromossômica entre a proteína semelhante à proteína associada aos microtúbulos de equinodermos 4 (EML4) e a quinase do linfoma anaplásico (ALK). Essa fusão impulsiona a sinalização oncogênica e torna as células NCI-H3122 altamente dependentes da sinalização de ALK para sua sobrevivência, o que é conhecido como “dependência de ALK”. O NCI-H3122 tornou-se um modelo fundamental para o estudo de terapias direcionadas, particularmente para inibidores de ALK, como o crizotinibe.

Estudos demonstraram que as células NCI-H3122 são sensíveis ao crizotinibe, que inibe a fosforilação da ALK e seus alvos a jusante, como as vias AKT e ERK. No entanto, frequentemente se desenvolve resistência ao crizotinibe, geralmente devido a vias de sinalização alternativas, como a ativação do receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR). Esse mecanismo de resistência foi confirmado em variantes resistentes do NCI-H3122, nas quais foi observado aumento da fosforilação do EGFR, e demonstrou-se que a inibição dupla de ALK e EGFR, por meio do uso de crizotinibe e inibidores de EGFR, como afatinibe ou erlotinibe, supera a resistência.

O NCI-H3122 é frequentemente utilizado para explorar terapias combinadas destinadas a prevenir ou reverter a resistência aos medicamentos. Por exemplo, o direcionamento das vias de ALK e EGFR tem sido uma estratégia bem-sucedida em modelos pré-clínicos, e essa inibição dupla tem sido sugerida como uma abordagem terapêutica potencial para pacientes com NSCLC ALK-positivo e resistente ao crizotinibe.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.