NCI-H3122

La linea cellulare NCI-H3122 deriva dal carcinoma polmonare non a piccole cellule (NSCLC) ed è caratterizzata dalla presenza del gene di fusione EML4-ALK, che risulta da una traslocazione cromosomica tra la proteina associata al microtubulo echinoderma simile a 4 (EML4) e la chinasi del linfoma anaplastico (ALK). Questa fusione guida la segnalazione oncogenica e rende le cellule NCI-H3122 altamente dipendenti dalla segnalazione di ALK per la sopravvivenza, note come "ALK-addicted" NCI-H3122 è diventato un modello chiave per lo studio di terapie mirate, in particolare per gli inibitori di ALK come crizotinib.

Gli studi hanno dimostrato che le cellule NCI-H3122 sono sensibili a crizotinib, che inibisce la fosforilazione di ALK e i suoi bersagli a valle, come le vie AKT ed ERK. Tuttavia, spesso si sviluppa una resistenza a crizotinib, tipicamente dovuta a vie di segnalazione alternative come l'attivazione del recettore del fattore di crescita epidermico (EGFR). Questo meccanismo di resistenza è stato confermato nelle varianti resistenti al NCI-H3122, dove è stata osservata un'aumentata fosforilazione dell'EGFR, e la doppia inibizione di ALK ed EGFR con crizotinib e inibitori dell'EGFR come afatinib o erlotinib ha dimostrato di superare la resistenza.

L'NCI-H3122 è spesso utilizzato per esplorare terapie di combinazione volte a prevenire o invertire la resistenza ai farmaci. Ad esempio, il bersaglio di entrambe le vie ALK ed EGFR è stata una strategia di successo nei modelli preclinici e questa doppia inibizione è stata suggerita come potenziale approccio terapeutico per i pazienti NSCLC ALK-positivi e resistenti a crizotinib.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia