NCI-H1975

La linea cellulare NCI-H1975 è un modello consolidato derivato dal carcinoma polmonare umano non a piccole cellule (NSCLC), in particolare l'adenocarcinoma. Questa linea cellulare è particolarmente significativa per le sue doppie mutazioni nel gene del recettore del fattore di crescita epidermico (EGFR). Presenta la mutazione attivante L858R nell'esone 21 e la mutazione T790M nell'esone 20, che conferisce resistenza agli inibitori della tirosin-chinasi (TKI) di prima generazione, come gefitinib ed erlotinib. Queste caratteristiche genetiche rendono NCI-H1975 uno strumento prezioso per lo studio dei meccanismi di resistenza ai farmaci e per la sperimentazione di inibitori dell'EGFR di nuova generazione.

La mutazione T790M altera la tasca di legame dell'ATP dell'EGFR, riducendo l'efficacia dei precedenti inibitori dell'EGFR pur mantenendo l'attività di segnalazione del recettore. Questa proprietà ha stimolato la ricerca di inibitori di terza generazione, come osimertinib, che colpiscono selettivamente l'EGFR mutante T790M risparmiando l'EGFR di tipo selvatico, riducendo gli effetti fuori bersaglio. Gli studi condotti su NCI-H1975 hanno contribuito a comprendere l'impatto strutturale e funzionale di queste mutazioni sulle vie di segnalazione mediate da EGFR, compresi gli effetti a valle sulle vie PI3K/AKT e RAS/RAF/MEK/ERK, che sono fondamentali per la proliferazione e la sopravvivenza delle cellule tumorali.

Oltre al suo ruolo nella ricerca sulla resistenza ai farmaci, l'NCI-H1975 è impiegato nella valutazione preclinica di terapie combinate che mirano a superare la resistenza agendo su più vie. Il suo profilo genetico e molecolare ben caratterizzato, che include dati dettagliati sulle variazioni del numero di copie e sui paesaggi mutazionali, ha consolidato il suo status di modello essenziale nello studio della biologia del NSCLC e dello sviluppo terapeutico.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia