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- Tessuto
- Polmone
- Malattia
- Carcinoma polmonare a grandi cellule
- Sito metastatico
- Versamento pleurico
- Sinonimi
- NCI-H460, NCI.H460, H-460, NCIH460, NCI-HUT-460, NCI-460
Documenti
NCI-H460
Cell line · Codice prodotto 305020
NCI-H460, also known as H460, was derived from a male patient with large cell lung carcinoma. NCI-H460 cells are adherent cells growing twice as fast than th...
Personalizzazione / Suggerimenti
- NCI-H460Cell line€430.00
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01Informazioni generali
- Descrizione
- Le cellule NCI-H460, note anche come H460, sono state derivate da un paziente maschio con carcinoma polmonare a grandi cellule. Le cellule NCI-H460 sono cellule aderenti che crescono due volte più velocemente delle cellule A549, con un tempo di raddoppio di 33 ore in RPMI 1640 integrato con il 10% di FBS. Possono formare tumori sia in vitro che in modelli in vivo, compresi i topi nudi. È stato dimostrato che le cellule NCI-H460 esprimono l'mRNA di p53 a livelli elevati, paragonabili a quelli del tessuto polmonare normale, pur non presentando anomalie strutturali grossolane del DNA. Si colorano positivamente per la cheratina e la vimentina, ma sono negative per la proteina triplette del neurofilamento. L'analisi isoenzimatica ha dimostrato che l'HPRT è localizzato sulla superficie di queste linee cellulari di cancro al polmone non a piccole cellule. Gli isoenzimi AK-1, ES-D e Me-2 sono espressi a livello 1, mentre la G6PD e gli isoenzimi PGM1 e PGM3 sono espressi, rispettivamente, a livello B e 1-2. Le cellule hanno un cariotipo ipotriploide con un numero modale di cromosomi pari a 57, che varia da 53 a 65. Sette cromosomi marcatori sono comuni a tutte le cellule, tra cui der(9)t(1;9)(q21;p24), der(9)t(7;9)(p11;p22), t(10q14q), der(16)t(7;16)(q11.23;q22). I loro elevati livelli di espressione di mRNA di p53 le rendono un modello adatto allo studio dei meccanismi molecolari del carcinoma polmonare non a piccole cellule.
- Tessuto
- Polmone
- Malattia
- Carcinoma polmonare a grandi cellule
- Sito metastatico
- Versamento pleurico
- Sinonimi
- NCI-H460
- NCI.H460
- H-460
- NCIH460
- NCI-HUT-460
- NCI-460
02Classificazione
- Organismo
- Umano
- Sesso
- Maschio
- Proprietà di crescita
- Aderente
- Livello di biosicurezza
- 1
03Caratteristiche
- Morfologia
- Epiteliale
- Tumorigenico
- Sì
04Identificatori
- Riferimento bibliografico
- H-460 (numero di catalogo Cytion 305020)
- Codice fiscale NCBI
- 9606
- Cellosaurus
- CVCL_0459
05Manipolazione e coltura
- Terreno di coltura
- RPMI 1640, w: 2,0 mM di glutammina stabile, w: 2,0 g/L di NaHCO3 (articolo Cytion numero 820700a)
- Atmosfera di incubazione
37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.
- Integratori
- Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
- Reagente di dissociazione
- Accutase
- Subcoltura
- Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
- Rinnovo dei fluidi
- da 2 a 3 volte alla settimana
- Scongelamento e coltura
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
06Controllo di qualità e crioconservazione
- Sterilità
La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.
Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.
- Terreno di coltura congelato
- Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
- Condizioni di conservazione
Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.
- Condizioni di spedizione
Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.
07Donatore
- Etnia
- Europeo
08Aspetti legali e di sicurezza
- Misure di sicurezza
- Quando si prevede di conservare una crioviale in azoto liquido per un futuro scongelamento, è obbligatorio attenersi a rigorose misure di sicurezza. Guanti e indumenti protettivi appropriati sono essenziali e l'uso di una maschera facciale o di occhiali di sicurezza è richiesto durante il trasferimento dei campioni congelati da o verso il serbatoio di azoto liquido. Questo per ridurre il rischio di lesioni dovute a potenziali esplosioni di crioviali al momento della rimozione, che possono provocare la proiezione di frammenti taglienti.
- Garanzia
Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto
Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia
- È richiesto un accordo di trasferimento di materiale
- Sì
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