Přejít na obsah
NCI-H460
Tkáň
Plíce
Nemoc
Velkobuněčný karcinom plic
Místo metastázy
Pleurální výpotek
Synonyma
NCI-H460, NCI.H460, H-460, NCIH460, NCI-HUT-460, NCI-460

Dokumenty

NCI-H460

Cell line · Číslo výrobku 305020

NCI-H460, also known as H460, was derived from a male patient with large cell lung carcinoma. NCI-H460 cells are adherent cells growing twice as fast than th...

€430.00bez DPH a poštovného

Přizpůsobení / Doporučení

Skladem
Lot
Doporučeno (nejčerstvější šarže)
  • CoA
1

01Obecné informace

Popis
NCI-H460, známý také jako H460, byl získán od pacienta s velkobuněčným karcinomem plic. Buňky NCI-H460 jsou adherentní buňky, které rostou dvakrát rychleji než buňky A549 a jejich doba zdvojení je 33 hodin v RPMI 1640 doplněném 10 % FBS. Mohou vytvářet nádory v modelech in vitro i in vivo, včetně nahých myší. Bylo prokázáno, že buňky NCI-H460 exprimují mRNA p53 ve vysoké míře srovnatelné s normální plicní tkání, přičemž nevykazují žádné hrubé strukturální abnormality DNA. Pozitivně se barví na keratin a vimentin, ale jsou negativní na neurofilamentový tripletový protein. Izoenzymová analýza ukázala, že HPRT je lokalizován na povrchu těchto buněčných linií nemalobuněčného karcinomu plic. Izoenzymy AK-1, ES-D a Me-2 jsou exprimovány na úrovni 1, zatímco izoenzymy G6PD a PGM1 a PGM3 jsou exprimovány na úrovni B, resp. 1-2. Buňky mají hypotriploidní karyotyp s modálním počtem chromozomů 57, v rozmezí 53 až 65. Sedm markerových chromozomů je společných všem buňkám, včetně der(9)t(1;9)(q21;p24), der(9)t(7;9)(p11;p22), t(10q14q), der(16)t(7;16)(q11.23;q22). Jejich vysoké hladiny exprese mRNA p53 z nich činí vhodný model pro studium molekulárních mechanismů nemalobuněčného karcinomu plic.
Tkáň
Plíce
Nemoc
Velkobuněčný karcinom plic
Místo metastázy
Pleurální výpotek
Synonyma
  • NCI-H460
  • NCI.H460
  • H-460
  • NCIH460
  • NCI-HUT-460
  • NCI-460

02Klasifikace

Organismus
Člověk
Sex
Muž
Růstové vlastnosti
Přívrženec
Úroveň biologické bezpečnosti
1

03Charakteristika

Morfologie
Epitelové
Tumorogenní
Ano

04Identifikátory

Citace
H-460 (katalogové číslo Cytion 305020)
Daňové identifikační číslo NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_0459

05Manipulace a chov

Pěstovací médium
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabilní glutamin, w: 2,0 g/l NaHCO3 (číslo výrobku Cytion 820700a)
Inkubační atmosféra

37 °C, 5 %CO2, zvlhčená atmosféra.

Doplňky stravy
Doplňte médium o 10% FBS
Disociační činidlo
Accutase
Subkultivace
Odstraňte staré médium z adherovaných buněk a promyjte je PBS bez vápníku a hořčíku. Pro baňky T25 použijte 3-5 ml PBS a pro baňky T75 5-10 ml. Poté buňky zcela zakryjte přípravkem Accutase, přičemž použijte 1-2 ml pro baňky T25 a 2,5 ml pro baňky T75. Nechte buňky inkubovat při pokojové teplotě po dobu 8-10 minut, aby se oddělily. Po inkubaci jemně promíchejte buňky s 10 ml média, aby byly znovu suspendovány, a poté je odstřeďte při 300xg po dobu 3 minut. Supernatant vyhoďte, buňky znovu rozpusťte v čerstvém médiu a přeneste je do nových baněk, které již obsahují čerstvé médium.
Obnova tekutin
2 až 3krát týdně
Rozmrazování a kultivace
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kontrola kvality a kryokonzervace

Sterilita

Kontaminace mykoplazmaty je vyloučena jak pomocí testů založených na PCR, tak pomocí luminiscenčních metod detekce mykoplazmy.

Aby se zajistilo, že nedojde ke kontaminaci bakteriemi, plísněmi nebo kvasinkami, jsou buněčné kultury denně podrobovány vizuálním kontrolám.

Mrazicí médium
Jako kryokonzervační médium používáme kompletní růstové médium (včetně FBS) + 10 % DMSO pro zajištění dostatečné životaschopnosti po rozmrazení nebo CM-1 (katalogové číslo 800100 společnosti Cytion), které obsahuje optimalizované osmoprotektanty a metabolické stabilizátory pro zlepšení regenerace a snížení stresu způsobeného kryo.
Podmínky skladování

Pro dlouhodobé uchování umístěte lahvičky do kapalného dusíku v plynné fázi při teplotě přibližně -150 až -196 °C. Skladování při -80 °C je přijatelné pouze jako krátký přechodný krok před přemístěním do kapalného dusíku.

Dopravní podmínky

Kryokonzervované buněčné linie se přepravují na suchém ledu v ověřených, izolovaných obalech s dostatečným množstvím chladiva, aby se po celou dobu přepravy udržovala teplota přibližně -78 °C. Po obdržení ihned zkontrolujte obal a neprodleně přeneste lahvičky do vhodného skladu.

07Dárce

Etnická příslušnost
Evropská