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NCI-H460
Tissue
Pulmão
Disease
Carcinoma pulmonar de células grandes
Metastatic site
Derrame pleural
Synonyms
NCI-H460, NCI.H460, H-460, NCIH460, NCI-HUT-460, NCI-460

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NCI-H460

Cell line · Product number 305020

NCI-H460, also known as H460, was derived from a male patient with large cell lung carcinoma. NCI-H460 cells are adherent cells growing twice as fast than th...

US$395.00excl. tax and shipping
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Recommended (freshest lot)
  • CoA
1

01General information

Description
A linha celular NCI-H460, também conhecida como H460, foi derivada de um paciente do sexo masculino com carcinoma pulmonar de células grandes. As células NCI-H460 são células aderentes que crescem duas vezes mais rápido do que as células A549, com um tempo de duplicação de 33 horas em RPMI 1640 suplementado com 10% de FBS. Elas podem formar tumores tanto em modelos in vitro quanto in vivo, incluindo camundongos nude. Foi demonstrado que as células NCI-H460 expressam mRNA de p53 em níveis elevados, comparáveis aos do tecido pulmonar normal, sem apresentar anomalias estruturais macroscópicas no DNA. Elas apresentam coloração positiva para queratina e vimentina, mas são negativas para a proteína triplete de neurofilamentos. A análise de isoenzimas demonstrou que a HPRT está localizada na superfície dessas linhagens celulares de câncer de pulmão de células não pequenas. As isoenzimas AK-1, ES-D e Me-2 são expressas no nível 1, enquanto as isoenzimas G6PD, PGM1 e PGM3 são expressas nos níveis B e 1-2, respectivamente. As células apresentam um cariótipo hipotriploide com um número modal de cromossomos de 57, variando de 53 a 65. Sete cromossomos marcadores são comuns a todas as células, incluindo der(9)t(1;9)(q21;p24), der(9)t(7;9)(p11;p22), t(10q14q), der(16)t(7;16)(q11.23;q22). Seus altos níveis de expressão do mRNA de p53 tornam essas células um modelo adequado para o estudo dos mecanismos moleculares do câncer de pulmão de células não pequenas.
Tissue
Pulmão
Disease
Carcinoma pulmonar de células grandes
Metastatic site
Derrame pleural
Synonyms
  • NCI-H460
  • NCI.H460
  • H-460
  • NCIH460
  • NCI-HUT-460
  • NCI-460

02Classification

Organism
Human
Sex
Male
Growth properties
Adherent
Biosafety level
1

03Characteristics

Morphology
Epithelial
Tumourigenic
Sim

04Identifiers

Citation
H-460 (número de catálogo da Cytion 305020)
NCBI TaxID
9606
Cellosaurus
CVCL_0459

05Handling and culture

Culture medium
RPMI 1640, com 2,0 mM de glutamina estável e 2,0 g/L de NaHCO₃ (número de artigo da Cytion: 820700a)
Incubation atmosphere

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

Supplements
Adicione 10% de FBS ao meio
Dissociation reagent
Accutase
Subculturing
Remova o meio antigo das células aderentes e lave-as com PBS sem cálcio nem magnésio. Para frascos T25, use 3 a 5 ml de PBS; para frascos T75, use 5 a 10 ml. Em seguida, cubra as células completamente com Accutase, utilizando 1 a 2 ml para frascos T25 e 2,5 ml para frascos T75. Deixe as células incubarem à temperatura ambiente por 8 a 10 minutos para que se desprendam. Após a incubação, misture delicadamente as células com 10 ml de meio para ressuspender, depois centrifugue a 300xg por 3 minutos. Descarte o sobrenadante, ressuspenda as células em meio fresco e transfira-as para novos frascos que já contenham meio fresco.
Fluid renewal
2 a 3 vezes por semana
Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Quality control and cryopreservation

Sterility

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Freeze medium
Como meio de criopreservação, utilizamos meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% de DMSO para garantir viabilidade adequada após o descongelamento, ou CM-1 (número de catálogo da Cytion 800100), que inclui osmoprotetores e estabilizadores metabólicos otimizados para melhorar a recuperação e reduzir o estresse induzido pela criopreservação.
Storage conditions

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

Shipping conditions

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

07Donor

Ethnicity
Europeu