NCI-H3122

La línea celular NCI-H3122 se deriva del cáncer de pulmón no microcítico (CPNM) y se caracteriza por la presencia del gen de fusión EML4-ALK, que resulta de una translocación cromosómica entre la proteína similar a la 4 asociada a microtúbulos equinoderma (EML4) y la linfoma quinasa anaplásica (ALK). Esta fusión impulsa la señalización oncogénica y hace que las células NCI-H3122 sean altamente dependientes de la señalización ALK para sobrevivir, lo que se conoce como "ALK-adictas" NCI-H3122 se ha convertido en un modelo clave para el estudio de terapias dirigidas, en particular para inhibidores de ALK como crizotinib.

Los estudios han demostrado que las células NCI-H3122 son sensibles al crizotinib, que inhibe la fosforilación de ALK y sus dianas descendentes, como las vías AKT y ERK. Sin embargo, a menudo se desarrolla resistencia al crizotinib, normalmente debido a vías de señalización alternativas como la activación del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR). Este mecanismo de resistencia se ha confirmado en las variantes resistentes a NCI-H3122, en las que se observó un aumento de la fosforilación del EGFR, y se demostró que la inhibición dual de ALK y EGFR mediante crizotinib e inhibidores del EGFR como afatinib o erlotinib superaba la resistencia.

El NCI-H3122 se utiliza con frecuencia para explorar terapias combinadas destinadas a prevenir o revertir la farmacorresistencia. Por ejemplo, atacar tanto la vía ALK como la vía EGFR ha sido una estrategia exitosa en modelos preclínicos, y esta inhibición dual se ha sugerido como un enfoque terapéutico potencial para pacientes con CPNM ALK-positivo resistentes a crizotinib.

37°C, 5%_CO2, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminación por micoplasma se excluye utilizando tanto ensayos basados en la PCR como métodos de detección de micoplasma basados en la luminiscencia.

Para garantizar la ausencia de contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, colocar los viales en nitrógeno líquido en fase vapor a una temperatura aproximada de -150 a -196 °C. El almacenamiento a -80 °C sólo es aceptable como breve paso intermedio antes de la transferencia al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares crioconservadas se envían en hielo seco en envases validados y aislados con suficiente refrigerante para mantener aproximadamente -78 °C durante el tránsito. A la recepción, inspeccione el envase inmediatamente y transfiera los viales sin demora al almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante los 60 días posteriores al envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales se ajustan a las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o Hoja de Producto

Para más información, consulte nuestra <a href=""/Quiénes somos/Garantía/"" hreflang=""x-default"">Declaración de garantía