NCI-H3122

La lignée cellulaire NCI-H3122 est dérivée d’un cancer du poumon à cellules non petites (CPNCP) et se caractérise par la présence du gène de fusion EML4-ALK, qui résulte d’une translocation chromosomique entre la protéine de type 4 associée aux microtubules des échinodermes (EML4) et la kinase du lymphome anaplasique (ALK). Cette fusion déclenche une voie de signalisation oncogénique et rend les cellules NCI-H3122 fortement dépendantes de la signalisation ALK pour leur survie; on parle alors de cellules « dépendantes de l’ALK ». La lignée NCI-H3122 est devenue un modèle clé pour l’étude des thérapies ciblées, en particulier pour les inhibiteurs d’ALK comme le crizotinib.

Des études ont démontré que les cellules NCI-H3122 sont sensibles au crizotinib, qui inhibe la phosphorylation de l’ALK et ses cibles en aval, telles que les voies AKT et ERK. Cependant, une résistance au crizotinib se développe souvent, généralement en raison de voies de signalisation alternatives comme l’activation du récepteur du facteur de croissance épidermique (EGFR). Ce mécanisme de résistance a été confirmé dans des variants résistants de la lignée NCI-H3122, chez lesquels une phosphorylation accrue de l’EGFR a été observée; il a été démontré qu’une double inhibition de l’ALK et de l’EGFR, à l’aide du crizotinib et d’inhibiteurs de l’EGFR tels que l’afatinib ou l’erlotinib, permettait de surmonter cette résistance.

La lignée NCI-H3122 est fréquemment utilisée pour explorer des thérapies combinées visant à prévenir ou à inverser la résistance aux médicaments. Par exemple, le ciblage simultané des voies ALK et EGFR s’est avéré une stratégie efficace dans des modèles précliniques, et cette double inhibition a été proposée comme approche thérapeutique potentielle pour les patients atteints d’un CPNPC ALK-positif et résistant au crizotinib.

37 °C, 5 % _de CO_₂, atmosphère humidifiée.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes par luminescence.

Afin de s’assurer qu’il n’y a aucune contamination bactérienne, fongique ou par des levures, les cultures cellulaires font l’objet d’inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placez les flacons dans de l’azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre environ −150 et −196 °C. L’entreposage à −80 °C n’est acceptable qu’à titre d’étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l’azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées dans de la glace sèche, dans un emballage isotherme validé contenant suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d’environ −78 °C pendant tout le transport. À la réception, inspectez immédiatement le conteneur et transférez sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous garantissons la qualité et la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours à compter de leur expédition depuis nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d’analyse et/ou la fiche technique du produit.

Pour plus de détails, veuillez consulter notre déclaration de garantie.