PM-LGSOC-01

A PM-LGSOC-01 é uma linhagem celular derivada da metástase peritoneal de um carcinoma ovariano seroso de baixo grau (LGSOC). Essa linhagem celular foi estabelecida como parte de um modelo de pesquisa abrangente que também incluiu um xenoenxerto derivado de paciente (PDX). A criação da PM-LGSOC-01 envolveu o enxerto ortotópico por meio da injeção de suspensão tumoral subperitoneal em camundongos SCID/Beige, resultando em um modelo PDX de metástase peritoneal (PM) transplantável em estágio inicial. A análise histológica confirmou que tanto as células do PM-PDX quanto as do PM-LGSOC-01 mantiveram os padrões de crescimento micropapilar e cribriforme típicos do LGSOC, com brotamento tumoral e expressão de marcadores como PAX8 e WT1. A análise genética mostrou que o tumor primário, a PM e a linhagem celular compartilham uma mutação KRAS c.35 G > T (p.Gly12Val), tornando este modelo relevante para o estudo da progressão do LGSOC e da resposta ao tratamento, particularmente em relação à via MAPK.

A PM-LGSOC-01 apresenta características-chave relevantes para a pesquisa pré-clínica. Possui um tempo de duplicação de aproximadamente 42 horas nas primeiras passagens, que diminuiu para 23 horas nos estágios posteriores da cultura celular, e tem se mantido por mais de 100 passagens in vitro. A linhagem celular apresenta morfologia epitelial com organização de tipo epitelial e alta adesão célula-célula. No entanto, ela demonstra resposta limitada à quimioterapia à base de platina, mas é altamente sensível ao paclitaxel (IC50: 6,3 ± 2,2 nM). Além disso, a PM-LGSOC-01 é particularmente sensível ao inibidor de MEK trametinibe (IC₅₀: 7,2 ± 0,5 nM), tanto in vitro quanto in vivo, refletindo o impacto da mutação no gene KRAS nas respostas terapêuticas.

O PM-LGSOC-01 serve como uma ferramenta valiosa para a investigação do LGSOC, particularmente no contexto da resistência a medicamentos, da tumorigenicidade e da sensibilidade a terapias direcionadas, como os inibidores de MEK. Seu uso no desenvolvimento de abordagens de tratamento personalizadas para o carcinoma ovariano seroso de baixo grau é fundamental, dada a baixa resposta do LGSOC à quimioterapia convencional em comparação com o carcinoma ovariano seroso de alto grau (HGSOC).

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.