Mine otse sisu juurde
PM-LGSOC-01
Kude
Munasarjad
Haigus
Madala astme seroosne munasarjakartsinoom
Metastaaside asukoht
Peritoneum
Sünonüümid
M28/2

Dokumendid

PM-LGSOC-01

Cell line · Toote number 300305

PM-LGSOC-01 is a cell line derived from peritoneal metastasis of a low-grade serous ovarian carcinoma (LGSOC). This cell line was established as part of a...

€800.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta
Laos
Lot
Soovitatav (värskeim partii)
  • CoA
1

01Üldine teave

Kirjeldus

PM-LGSOC-01 on rakuliin, mis on saadud madala seroosse munasarjakartsinoomi (LGSOC) peritoneaalsetest metastaasidest. See rakuliin loodi osana terviklikust uurimismudelist, mis hõlmas ka patsiendist saadud ksenotransplantaati (PDX). PM-LGSOC-01 loomine hõlmas ortotoopilist siirdamist subperitoneaalse kasvajapudeli süstimise teel SCID/Beige hiirtesse, mis viis varajases staadiumis siirdatava peritoneaalse metastaasi (PM)-PDX-mudeli tekkimiseni. Histoloogiline analüüs kinnitas, et nii PM-PDX kui ka PM-LGSOC-01 rakud säilitasid LGSOC-le iseloomulikud mikropapillaarsed ja ribriformsed kasvumustrid, koos kasvajate pungistumisega ja selliste markerite nagu PAX8 ja WT1 ekspressiooniga. Geneetiline analüüs näitas, et primaarsel kasvajal, PM-il ja rakuliinil on ühine KRAS c.35 G > T (p.Gly12Val) mutatsioon, mis muudab selle mudeli asjakohaseks LGSOC-i progresseerumise ja ravivastuse uurimiseks, eriti seoses MAPK-radaga.

PM-LGSOC-01 omab prekliiniliste uuringute jaoks olulisi põhiomadusi. Selle kahekordistumisaeg on varajases faasis ligikaudu 42 tundi, mis vähenes 23 tunnini hilisemates rakukultuuride etappides, ja seda on säilitatud üle 100 in vitro faasi. Rakuliinil on epiteeli morfoloogia koos epiteeli sarnase organismi ja suure rakkude-rakkude adhesiivsusega. Siiski reageerib see piiratud määral plaatinapõhisele kemoteraapiale, kuid on väga tundlik paklitakseeli suhtes (IC50: 6,3 ± 2,2 nM). Lisaks on PM-LGSOC-01 eriti tundlik MEK-inhibiitori trametiniibi suhtes (IC50: 7,2 ± 0,5 nM) nii in vitro kui ka in vivo, mis näitab KRAS-mutatsiooni mõju ravivastusele.

PM-LGSOC-01 on väärtuslik vahend LGSOC-i uurimiseks, eriti ravimresistentsuse, kasvajalisuse ja tundlikkuse suhtes sihtotstarbeliste ravimeetodite, nagu MEK-inhibiitorid, kontekstis. Selle kasutamine madala seroosse munasarjakartsinoomi personaliseeritud ravimeetodite väljatöötamisel on kriitilise tähtsusega, arvestades LGSOC-i kehva tundlikkust tavapärase keemiaravi suhtes võrreldes kõrge seroosse munasarjakartsinoomiga (HGSOC).

Kude
Munasarjad
Haigus
Madala astme seroosne munasarjakartsinoom
Metastaaside asukoht
Peritoneum
Sünonüümid
  • M28/2

02Klassifikatsioon

Organism
Inimene
Sugu
Naine
Kasvuvõime
Järgija
Bioloogilise ohutuse tase
1

03Omadused

Morfoloogia
Epiteelilaadsed
Kahekordistumisaeg
42 tundi

04Tunnused

Viide
PM-LGSOC-01 (Cytioni katalooginumber 300305)
NCBI maksukood
9606
Cellosaurus
CVCL_xx32

05Avaldumine ja vastuvõtlikkus

Mutatsiooniprofiil
KRAS c.35 G > T (p.(Gly12Val)) mutatsioon

06Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamiin, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytioni artikli number 820100a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Täiendada söötme 10% FBS ja 1% NEAAga
Dissotsiatsioonireaktiiv
Accutase
Kultuuri edasikasvatamine
Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Külvitihedus
1 x 104 rakku/cm2
Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

08Annetaja

Doonori vanus
60 aastat