RLE-6TN

A linhagem celular RLE-6TN é uma linhagem de células epiteliais alveolares do tipo II de rato imortalizadas, derivadas de ratos Fischer 344 adultos. A RLE-6TN foi estabelecida por meio de imortalização espontânea durante tentativas de introduzir o gene do antígeno SV40-T em células epiteliais alveolares do tipo II primárias. Ao contrário de sua contraparte, a RLE-6T, que foi transfectada positivamente com o antígeno SV40-T, as células RLE-6TN não expressam o gene do antígeno T. Apesar disso, as células RLE-6TN mantêm características morfológicas e funcionais essenciais, típicas das células alveolares do tipo II, incluindo a expressão de citoqueratina e a presença de corpos de inclusão lamelares contendo lipídios.

As células RLE-6TN têm sido amplamente utilizadas como modelo in vitro para investigar a biologia das células epiteliais pulmonares, a função alveolar e as respostas a diversos estímulos fisiológicos e patológicos. Elas são particularmente relevantes para o estudo da regulação e da atividade da Na-K-ATPase nas células epiteliais alveolares. A Na-K-ATPase é essencial para a manutenção dos gradientes iônicos celulares e do transporte trans-epitelial de íons, processos críticos para a eliminação do líquido alveolar nos pulmões. Em estudos, demonstrou-se que o hormônio tireoidiano (T3) estimula a atividade da Na-K-ATPase nas células RLE-6TN ao aumentar sua translocação para a membrana plasmática, em vez de aumentar sua transcrição, destacando um mecanismo regulatório novo e rápido.

As células RLE-6TN apresentam crescimento estável, com estabilidade cariotípica quase diploide, e não são tumorigênicas em camundongos nude. Elas são negativas para a atividade da fosfatase alcalina, mas apresentam coloração positiva para as citoqueratinas 8, 18 e 19, confirmando sua origem epitelial. As células RLE-6TN podem ser mantidas em cultura por longo prazo e servem como uma plataforma confiável para estudos mecanísticos sobre a reparação do epitélio alveolar, o metabolismo do surfactante e as respostas celulares à lesão pulmonar, toxinas e agentes terapêuticos.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.