الانتقال إلى المحتوى
مدفع هاون من طراز GC-1
الأنسجة
الخصية
المرادفات
GC-1spg, GC-1, GC1-SPG

المستندات

مدفع هاون من طراز GC-1

Cell line · رقم المنتج 300375

تم جعل خط الخلايا spg GC-1 خالدًا من خلال إدخال البلازميد pSV3-neo، الذي يحمل التسلسلات المشفرة لمستضد T الكبير لفيروس SV40 و...

€550.00باستثناء الضريبة وتكاليف الشحن
متوفر
لوت
موصى بها (أحدث دفعة)
  • CoA
1

01معلومات عامة

الوصف

تم تخليد خط خلايا GC-1 spg من خلال نقل البلازميد pSV3-neo، الذي يحتوي على تسلسلات الترميز لمستضد SV40 الكبير T ومقاومة النيومايسين. لا يوفر هذا التعديل الوراثي مقاومة لبعض المضادات الحيوية فحسب، بل يعزز أيضًا النمو المستمر للخلايا عن طريق تغيير تنظيم دورة الخلية، وبالتالي تجاوز حد هايفليك النموذجي للخلايا الأولية. وتسمح عملية التخليد هذه للخلايا بالحفاظ على قدرتها التكاثرية مع الاحتفاظ بالخصائص المظهرية الرئيسية للحيوانات المنوية.

من الناحية المظهرية، يُظهر خط خلايا GC-1 spg الخلوية خصائص تشير إلى مرحلة انتقالية بين الخلايا المنوية من النوع B والخلايا المنوية الأولية، مما يجعلها نموذجاً مناسباً بشكل خاص لدراسة المراحل المبكرة من تكوين الحيوانات المنوية. تعبر الخلايا عن اثنين من البروتينات الأيزوبروتينية الخاصة بالخصيتين: السيتوكروم ج ولاكتات نازعة هيدروجينيز C4. وتعد هذه العلامات ضرورية لدراسة استقلاب الخلايا وإدارة الطاقة أثناء تكوين الحيوانات المنوية، مما يعكس مسارات الأيض الفريدة النشطة في الخلايا الجرثومية. يؤكد التعبير عن هذه البروتينات المتساوية المحددة على فائدة خط الخلية في استكشاف الجوانب الكيميائية الحيوية والفسيولوجية لوظيفة خلايا الخصية وتطورها.

الأنسجة
الخصية
التطبيقات
زراعة الخلايا ثلاثية الأبعاد
المرادفات
  • GC-1spg
  • GC-1
  • GC1-SPG

02التصنيف

كائن حي
الماوس
الجنس
ذكر
خصائص النمو
الملتزم
حالة الكائنات المعدلة وراثيًا
GMO-S1
تفاصيل حالة الكائنات المعدلة وراثيًا
GMO-S1: This murine testis cell line (GC-1 spg) contains an SV40 T-Antigen expression plasmid (pSV3neo) including a Tn5-neo resistance marker, supporting immortalization. The construct is stably integrated into mouse spermatogonial cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
مستوى السلامة البيولوجية
1

03الخصائص

المورفولوجيا
الظهارة
نوع الخلية
الخلية المنوية

04المعرّفات

المرجع
GC-1 spg (الرقم الكتالوجي لسيتيون 300375)
رقم التعريف الضريبي لدى NCBI
10090
سيلوصور
CVCL_8872

05التعبير والقابلية للإصابة

الفيروسات
المتحوِّل: مستضد فيروس سيميان 40 (SV40) T

06التعامل مع النباتات وزراعتها

وسط الاستزراع
DMEM، ث: 4.5 جم/لتر جلوكوز، ث: 4 مليمتر جلوتامين، ث: 3.7 جم/لتر NaHCO3، ث: 1.0 مليمتر بيروفات الصوديوم (رقم المادة 820300a من سايتيون)
بيئة الحضانة

37 درجة مئوية، و5% من ثاني أكسيد الكربون في جو مرطب.

المكملات الغذائية
قم بتزويد الوسط ب 10٪ من ال FBS
كاشف التفكك
أكوتاس
إعادة الاستنبات
قم بإزالة الوسط القديم من الخلايا الملتصقة واغسلها باستخدام PBS الذي يفتقر إلى الكالسيوم والمغنيسيوم. بالنسبة لقوارير T25، استخدم 3-5 مل من PBS، وبالنسبة لقوارير T75، استخدم 5-10 مل. ثم، قم بتغطية الخلايا بالكامل باستخدام أكوتاز، باستخدام 1-2 مل لقوارير T25 و2.5 مل لقوارير T75. دع الخلايا تحتضن في درجة حرارة الغرفة لمدة 8-10 دقائق لفصلها. بعد الحضانة، اخلط الخلايا برفق مع 10 مل من الوسط لإعادة ترسيبها، ثم اطردها مركزيًا بسرعة 300xg لمدة 3 دقائق. تخلص من المادة الطافية، وأعد غمر الخلايا في وسط جديد وانقلها إلى قوارير جديدة تحتوي بالفعل على وسط جديد.
إذابة الثلج والزراعة
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07مراقبة الجودة والحفظ بالتبريد

العقم

يُستبعد التلوث بالميكوبلازما باستخدام كل من المقايسات القائمة على تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وطرق الكشف عن الميكوبلازما القائمة على التألق.

ولضمان عدم وجود تلوث بكتيري أو فطري أو خميرة يتم إخضاع مزارع الخلايا للفحص البصري اليومي.

وسط التجميد
كوسيط للحفظ بالتبريد، نستخدم وسط نمو كامل (بما في ذلك FBS) + 10% DMSO من أجل الحفاظ على حيوية كافية بعد ذوبان الجليد أو CM-1 (كتالوج Cytion رقم 800100)، والذي يتضمن مواد حماية أسموزموبيروتيكتية ومثبتات أيضية مُحسّنة لتعزيز التعافي وتقليل الإجهاد الناجم عن التبريد.
شروط التخزين

للحفظ طويل الأمد، ضع القوارير في نيتروجين سائل في طور البخار عند درجة حرارة تتراوح بين -150 و -196 درجة مئوية تقريباً. يُقبل التخزين عند درجة حرارة -80 درجة مئوية فقط كخطوة مؤقتة قصيرة قبل النقل إلى النيتروجين السائل.

شروط الشحن

تُشحن خطوط الخلايا المحفوظة بالتبريد على ثلج جاف في عبوات معزولة وموثوقة مع مبرد كافٍ للحفاظ على درجة حرارة -78 درجة مئوية تقريبًا طوال فترة النقل. عند الاستلام، افحص الحاوية على الفور وانقل القوارير دون تأخير إلى المخزن المناسب.

08المانح

السلالة / النوع الفرعي
بالب/ج
عمر المتبرع
10 أيام