GC-1 spg

A linhagem celular GC-1 spg foi imortalizada por meio da transfecção com o plasmídeo pSV3-neo, que contém as sequências codificadoras do antígeno T grande do SV40 e da resistência à neomicina. Essa modificação genética não apenas confere resistência a certos antibióticos, mas também promove o crescimento contínuo das células ao alterar a regulação do ciclo celular, contornando assim o limite de Hayflick, típico das células primárias. Esse processo de imortalização permite que as células mantenham a capacidade proliferativa, ao mesmo tempo em que conservam características fenotípicas essenciais das espermatogônias.

Fenotipicamente, a linhagem celular GC-1 spg exibe características indicativas de um estágio de transição entre as espermatogônias do tipo B e os espermatócitos primários, tornando-a um modelo especialmente relevante para o estudo dos estágios iniciais da espermatogênese. As células expressam duas isoproteínas específicas dos testículos: o citocromo c e a lactato desidrogenase C4. Esses marcadores são cruciais para o estudo do metabolismo celular e da gestão de energia durante a espermatogênese, refletindo as vias metabólicas únicas ativas nas células germinativas. A expressão dessas isoproteínas específicas ressalta a utilidade da linhagem celular na exploração dos aspectos bioquímicos e fisiológicos da função e do desenvolvimento das células testiculares.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.