الانتقال إلى المحتوى
MML-1
الأنسجة
البشرة
المرض
الورم الميلانيني
المرادفات
MML1

المستندات

MML-1

Cell line · رقم المنتج 300288

سلسلة الخلايا MML-1 هي سلسلة خلايا سرطانية مستمدة من ورم الميلانوما الخبيث. وتُستخدم هذه السلسلة بشكل أساسي لدراسة بيولوجيا ورم الميلانوما، ولا سيما...

€800.00باستثناء الضريبة وتكاليف الشحن

التخصيص / التوصيات

متوفر
لوت
موصى بها (أحدث دفعة)
1

01معلومات عامة

الوصف

خط الخلايا MML-1 هو خط خلايا الورم الميلانيني المشتق من الورم الميلانيني الخبيث. ويُستخدم هذا الخط الخلوي في المقام الأول لدراسة بيولوجيا الورم الميلانيني وخاصةً دور الحويصلات خارج الخلية في التواصل بين الخلايا وتطور الورم. تُطلق خلايا MML-1 أنواعًا فرعية مختلفة من المركبات الخارجية، بما في ذلك الجسيمات الخارجية والحويصلات الدقيقة والأجسام المبرمجة، وكل منها يحمل حمض نووي ريبوزي متميز، مثل الحمض النووي الريبوزي الميكروي (miRNAs) وغيره من الحمض النووي الريبوزي غير المشفر.

وقد أثبتت الدراسات التي أجريت باستخدام خلايا MML-1 أن الجسيمات الخارجية المنبعثة من هذه الخلايا تحتوي على حمض نووي رنا ريبوزي معين مثل miRNAs مثل miR-214-3p و miR-199a-3p و miR-155-5p، والتي ترتبط ارتباطًا وثيقًا بتطور الورم الميلانيني والورم الخبيث. يتم إثراء هذه miRNAs في الجسيمات الخارجية مقارنةً بأنواع أخرى من المركبات الخارجية وقد تم ربطها بمسارات مهمة مرتبطة بالورم الميلانيني مثل تنظيم مسار إشارات MAPK وتفاعلات البيئة الدقيقة للورم. ومن المثير للاهتمام أن المقارنات بين ملفات تعريف الحمض النووي الريبوزي المرسال (miRNA) من الجسيمات الخارجية المشتقة من MML-1 مع العينات السريرية للورم الميلانيني تظهر تداخلًا كبيرًا، مما يشير إلى الأهمية السريرية لهذا النموذج الخلوي في فهم تطور الورم الميلانيني.

وبالإضافة إلى الحمض النووي الريبوزي النووي (miRNAs)، تطلق خلايا MML-1 أيضًا حمض نووي ريبوزي آخر غير مشفر مثل الحمض النووي الريبوزي النووي الصغير (snoRNAs) والحمض النووي الريبوزي الناقل المرتبط بالميتوكوندريا (mt-RNAs)، والتي تتوزع بشكل متباين بين الأنواع الفرعية للميلانينوما الخارجية. وتسلط هذه النتائج الضوء على فائدة خط خلايا MML-1 في دراسة الآليات الجزيئية للورم الميلانيني وخاصة كيفية تواصل الخلايا السرطانية عبر المركبات الإلكترونية الخارجية وتأثيرها على بيئتها الدقيقة.

الأنسجة
البشرة
المرض
الورم الميلانيني
المرادفات
  • MML1

02التصنيف

كائن حي
إنسان
الجنس
غير محدد
خصائص النمو
الملتزم
مستوى السلامة البيولوجية
1

03الخصائص

المورفولوجيا
شبيه بالظهارة
مُسبِّب للأورام
نعم، في الفئران العارية

04المعرّفات

المرجع
MML-1 (كتالوج سيتيون رقم 300288)
رقم التعريف الضريبي لدى NCBI
9606
سيلوصور
CVCL_6004

05التعبير والقابلية للإصابة

التعبير البروتيني
P53 إيجابي
الأنماط الطفريّة
تم تحديد طفرة V600E من نوع V600E BRAF بالطرق القائمة على الحمض النووي (التسلسل، والتفاعل البوليمتري التكراري التسلسلي (RT-PCR) والطرق القائمة على البروتين (لطخة ويسترن بلوت).
إنزيم النسخ العكسي
سلبي

06التعامل مع النباتات وزراعتها

وسط الاستزراع
RPMI 1640، ث: 2.0 مللي مولار جلوتامين مستقر، ث: 2.0 جم/لتر NaHCO3 (رقم المادة 820700a من سايتيون)
بيئة الحضانة

37 درجة مئوية، و5% من ثاني أكسيد الكربون في جو مرطب.

المكملات الغذائية
قم بتزويد الوسط ب 10٪ من ال FBS
كاشف التفكك
أكوتاس
إعادة الاستنبات
قم بإزالة الوسط القديم من الخلايا الملتصقة واغسلها باستخدام PBS الذي يفتقر إلى الكالسيوم والمغنيسيوم. بالنسبة لقوارير T25، استخدم 3-5 مل من PBS، وبالنسبة لقوارير T75، استخدم 5-10 مل. ثم، قم بتغطية الخلايا بالكامل باستخدام أكوتاز، باستخدام 1-2 مل لقوارير T25 و2.5 مل لقوارير T75. دع الخلايا تحتضن في درجة حرارة الغرفة لمدة 8-10 دقائق لفصلها. بعد الحضانة، اخلط الخلايا برفق مع 10 مل من الوسط لإعادة ترسيبها، ثم اطردها مركزيًا بسرعة 300xg لمدة 3 دقائق. تخلص من المادة الطافية، وأعد غمر الخلايا في وسط جديد وانقلها إلى قوارير جديدة تحتوي بالفعل على وسط جديد.
كثافة البذر
1 × 104 خلية/سم2
تجديد السوائل
2 إلى 3 مرات في الأسبوع
التعافي بعد ذوبان الجليد
بعد الذوبان، ضع الخلايا في طبق بمعدل 5 × 104 خلية/سم2 واترك الخلايا تتعافى من عملية التجميد وتلتصق لمدة 24 ساعة على الأقل.
إذابة الثلج والزراعة
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07مراقبة الجودة والحفظ بالتبريد

العقم

يُستبعد التلوث بالميكوبلازما باستخدام كل من المقايسات القائمة على تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وطرق الكشف عن الميكوبلازما القائمة على التألق.

ولضمان عدم وجود تلوث بكتيري أو فطري أو خميرة يتم إخضاع مزارع الخلايا للفحص البصري اليومي.

وسط التجميد
كوسيط للحفظ بالتبريد، نستخدم وسط نمو كامل (بما في ذلك FBS) + 10% DMSO من أجل الحفاظ على حيوية كافية بعد ذوبان الجليد أو CM-1 (كتالوج Cytion رقم 800100)، والذي يتضمن مواد حماية أسموزموبيروتيكتية ومثبتات أيضية مُحسّنة لتعزيز التعافي وتقليل الإجهاد الناجم عن التبريد.
شروط التخزين

للحفظ طويل الأمد، ضع القوارير في نيتروجين سائل في طور البخار عند درجة حرارة تتراوح بين -150 و -196 درجة مئوية تقريباً. يُقبل التخزين عند درجة حرارة -80 درجة مئوية فقط كخطوة مؤقتة قصيرة قبل النقل إلى النيتروجين السائل.

شروط الشحن

تُشحن خطوط الخلايا المحفوظة بالتبريد على ثلج جاف في عبوات معزولة وموثوقة مع مبرد كافٍ للحفاظ على درجة حرارة -78 درجة مئوية تقريبًا طوال فترة النقل. عند الاستلام، افحص الحاوية على الفور وانقل القوارير دون تأخير إلى المخزن المناسب.

08المانح

عمر المتبرع
غير محدد