Mine otse sisu juurde
MML-1
Kude
Nahk
Haigus
Melanoom
Sünonüümid
MML1

Dokumendid

MML-1

Cell line · Toote number 300288

MML-1 rakuliin on pahaloomulisest melanoomist saadud melanoomi rakuliin. Seda rakuliini kasutatakse peamiselt melanoomi bioloogia uurimiseks, eriti ...

€800.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta
Laos
Lot
Soovitatav (värskeim partii)
1

01Üldine teave

Kirjeldus

MML-1 rakuliin on melanoomi rakuliin, mis on saadud pahaloomulisest melanoomist. Seda rakuliini kasutatakse peamiselt melanoomi bioloogia uurimiseks, eelkõige rakuvälise vesiklite (EV) rolli uurimiseks rakkudevahelises suhtluses ja kasvajate progresseerumises. MML-1 rakud vabastavad erinevaid EVde alatüüpe, sealhulgas eksosoomid, mikrovesiklid ja apoptootilised kehad, millest igaüks kannab erinevaid RNA-kooslusi, näiteks mikroRNAsid (miRNAd) ja muid mittekodeerivaid RNAsid.

Uuringud MML-1 rakkudega on näidanud, et nendest rakkudest vabanevad eksosoomid sisaldavad spetsiifilisi miRNAsid, nagu miR-214-3p, miR-199a-3p ja miR-155-5p, mis on tihedalt seotud melanoomi progresseerumise ja metastaasiga. Need miRNAd on eksosoomides võrreldes teiste EV-tüüpidega rikastatud ja neid on seostatud oluliste melanoomiga seotud radadega, nagu MAPK-signaalitee reguleerimine ja kasvaja mikrokeskkonna interaktsioonid. Huvitaval kombel näitavad MML-1-st saadud eksosoomide ja kliiniliste melanoomiproovide miRNA-profiilide võrdlused märkimisväärset kattumist, mis näitab selle rakumudeli kliinilist tähtsust melanoomi progresseerumise mõistmisel.

Lisaks miRNAdele vabastavad MML-1 rakud ka teisi mittekodeerivaid RNAsid, nagu väikesed nukleolaarsed RNAd (snoRNAd) ja mitokondriaalse ülekande RNAd (mt-RNAd), mis on EV alatüüpide vahel erinevalt jaotunud. Need leiud rõhutavad MML-1 rakuliini kasulikkust melanoomi molekulaarmehhanismide uurimisel, eelkõige seda, kuidas kasvajarakud suhtlevad EVde kaudu ja mõjutavad oma mikrokeskkonda.

Kude
Nahk
Haigus
Melanoom
Sünonüümid
  • MML1

02Klassifikatsioon

Organism
Inimene
Sugu
Määratlemata
Kasvuvõime
Järgija
Bioloogilise ohutuse tase
1

03Omadused

Morfoloogia
Epiteelilaadsed
Tuumorigeenne
Jah, alasti hiirtel

04Tunnused

Viide
MML-1 (Cytioni katalooginumber 300288)
NCBI maksukood
9606
Cellosaurus
CVCL_6004

05Avaldumine ja vastuvõtlikkus

Valgu ekspressioon
P53 positiivne
Mutatsiooniprofiil
V600E tüüpi BRAF-mutatsioon määrati DNA-põhiste meetodite (sekveneerimine, RT-PCR) ja valgupõhiste meetodite (Western Blot) abil.
Pöördtranskriptaas
Negatiivne

06Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiilne glutamiin, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytioni artikli number 820700a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Täiendada söötme 10% FBS-ga
Dissotsiatsioonireaktiiv
Accutase
Kultuuri edasikasvatamine
Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Külvitihedus
1 x 104 rakku/cm2
Vedeliku vahetus
2 kuni 3 korda nädalas
Taastumine pärast sulamist
Pärast sulatamist asetage rakud plaadile tihedusega 5 x 104 rakku/cm2 ja laske rakkudel külmutamisprotsessist taastuda ja kinnituda vähemalt 24 tunni jooksul.
Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

08Annetaja

Doonori vanus
Täpsustamata