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MML-1
Pañuelo de papel
Piel
Enfermedad
Melanoma
Sinónimos
MML1

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MML-1

Cell line · Número de producto 300288

La línea celular MML-1 es una línea celular de melanoma derivada de un melanoma maligno. Esta línea celular se utiliza principalmente para estudiar la biología del melanoma, en particular...

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01Información general

Descripción

La línea celular MML-1 es una línea celular de melanoma derivada de un melanoma maligno. Esta línea celular se utiliza principalmente para estudiar la biología del melanoma, en particular el papel de las vesículas extracelulares (VE) en la comunicación célula a célula y la progresión tumoral. Las células MML-1 liberan varios subtipos de VE, como exosomas, microvesículas y cuerpos apoptóticos, cada uno de los cuales transporta cargas de ARN distintas, como microARN (miARN) y otros ARN no codificantes.

Estudios realizados con células MML-1 han demostrado que los exosomas liberados por estas células contienen miARN específicos como miR-214-3p, miR-199a-3p y miR-155-5p, que están estrechamente relacionados con la progresión del melanoma y la metástasis. Estos miRNAs están enriquecidos en exosomas en comparación con otros tipos de EV y se han relacionado con importantes vías relacionadas con el melanoma, como la regulación de la vía de señalización MAPK y las interacciones del microambiente tumoral. Curiosamente, las comparaciones de los perfiles de miARN de exosomas derivados de MML-1 con muestras clínicas de melanoma muestran un solapamiento significativo, lo que indica la relevancia clínica de este modelo celular para comprender la progresión del melanoma.

Además de miRNAs, las células MML-1 también liberan otros RNAs no codificantes como pequeños RNAs nucleolares (snoRNAs) y RNAs de transferencia asociados a mitocondrias (mt-RNAs), que se distribuyen diferencialmente entre los subtipos de EV. Estos hallazgos ponen de relieve la utilidad de la línea celular MML-1 para estudiar los mecanismos moleculares del melanoma, en particular cómo las células tumorales se comunican a través de las VE e influyen en su microentorno.

Pañuelo de papel
Piel
Enfermedad
Melanoma
Sinónimos
  • MML1

02Clasificación

Organismo
Humano
Sexo
Sin especificar
Propiedades de crecimiento
Adherente
Nivel de bioseguridad
1

03Características

Morfología
De tipo epitelial
Tumorigénico
Sí, en ratones desnudos

04Identificadores

Referencia
MML-1 (número de catálogo 300288 de Cytion)
N.º de identificación fiscal del NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_6004

05Expresión y susceptibilidad

Expresión de proteínas
P53 positivo
Perfil mutacional
La mutación BRAF de tipo V600E se determinó mediante métodos basados en el ADN (secuenciación, RT-PCR) y métodos basados en proteínas (Western Blot).
Transcriptasa inversa
Negativo

06Manejo y cultivo

Medio de cultivo
RPMI 1640, con: 2,0 mM de glutamina estable, con: 2,0 g/L de NaHCO3 (número de artículo de Cytion 820700a)
Atmósfera de incubación

37°C, 5%CO2, atmósfera humidificada.

Suplementos
Complementar el medio con un 10% de FBS
Reactivo de disociación
Accutase
Subcultivo
Retire el medio antiguo de las células adheridas y lávelas con PBS que carezca de calcio y magnesio. Para matraces T25, utilice 3-5 ml de PBS, y para matraces T75, utilice 5-10 ml. A continuación, cubra completamente las células con Accutase, utilizando 1-2 ml para matraces T25 y 2,5 ml para matraces T75. Deje incubar las células a temperatura ambiente durante 8-10 minutos para desprenderlas. Tras la incubación, mezclar suavemente las células con 10 ml de medio para resuspenderlas y, a continuación, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Desechar el sobrenadante, resuspender las células en medio fresco y transferirlas a nuevos matraces que ya contengan medio fresco.
Densidad de siembra
1 x 104 células/cm2
Renovación de fluidos
de 2 a 3 veces por semana
Recuperación tras la descongelación
Después de descongelar, siembre las células a 5 x 104 células/cm2 y deje que las células se recuperen del proceso de congelación y se adhieran durante al menos 24 horas.
Descongelación y cultivo
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Control de calidad y criopreservación

Esterilidad

La contaminación por micoplasma se excluye utilizando tanto ensayos basados en la PCR como métodos de detección de micoplasma basados en la luminiscencia.

Para garantizar la ausencia de contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Medio de congelación
Como medio de criopreservación, utilizamos el medio de crecimiento completo (incluido FBS) + 10% DMSO para una viabilidad adecuada tras la descongelación, o CM-1 (número de catálogo 800100 de Cytion), que incluye osmoprotectores optimizados y estabilizadores metabólicos para mejorar la recuperación y reducir el estrés crioinducido.
Condiciones de almacenamiento

Para la conservación a largo plazo, colocar los viales en nitrógeno líquido en fase vapor a una temperatura aproximada de -150 a -196 °C. El almacenamiento a -80 °C sólo es aceptable como breve paso intermedio antes de la transferencia al nitrógeno líquido.

Condiciones de envío

Las líneas celulares crioconservadas se envían en hielo seco en envases validados y aislados con suficiente refrigerante para mantener aproximadamente -78 °C durante el tránsito. A la recepción, inspeccione el envase inmediatamente y transfiera los viales sin demora al almacenamiento adecuado.

08Donante

Edad del donante
Sin especificar