Siirry sisältöön
MML-1
Kudos
Iho
Sairaus
Melanooma
Synonyymit
MML1

Asiakirjat

MML-1

Cell line · Tuotenumero 300288

MML-1-solulinja on pahanlaatuisesta melanoomasta peräisin oleva melanoomasolulinja. Tätä solulinjaa käytetään pääasiassa melanooman biologian tutkimiseen, erityisesti ...

€800.00ilman veroja ja toimituskuluja
Varastossa
Lot
Suositeltava (tuorein erä)
1

01Yleistä tietoa

Kuvaus

MML-1-solulinja on pahanlaatuisesta melanoomasta peräisin oleva melanoomasolulinja. Tätä solulinjaa käytetään ensisijaisesti melanooman biologian tutkimiseen, erityisesti solunulkoisten vesikkelien (EV) roolin tutkimiseen solujen välisessä viestinnässä ja kasvaimen etenemisessä. MML-1-solut vapauttavat erilaisia EV:n alatyyppejä, kuten eksosomeja, mikrovesikkeleitä ja apoptoottisia elimiä, joista kukin kuljettaa erilaista RNA-kuormaa, kuten mikroRNA:ita (miRNA) ja muita ei-koodaavia RNA:ita.

MML-1-soluilla tehdyt tutkimukset ovat osoittaneet, että näistä soluista vapautuvat eksosomit sisältävät erityisiä miRNA:ita, kuten miR-214-3p, miR-199a-3p ja miR-155-5p, jotka liittyvät läheisesti melanooman etenemiseen ja metastaasiin. Nämä miRNA:t rikastuvat eksosomeissa muihin EV-tyyppeihin verrattuna, ja ne on yhdistetty tärkeisiin melanoomaan liittyviin reitteihin, kuten MAPK-signalointireitin säätelyyn ja kasvaimen mikroympäristön vuorovaikutukseen. Mielenkiintoista on, että MML-1:stä peräisin olevien eksosomien ja kliinisten melanoomanäytteiden miRNA-profiilien vertailu osoittaa merkittävää päällekkäisyyttä, mikä osoittaa tämän solumallin kliinisen merkityksen melanooman etenemisen ymmärtämisessä.

MML-1-solut vapauttavat miRNA:iden lisäksi myös muita ei-koodaavia RNA:ita, kuten pieniä nukleolaarisia RNA:ita (snoRNA:ita) ja mitokondrioihin assosioituneita siirtorNA:ita (mt-RNA:ita), jotka jakautuvat eri tavoin EV-alatyyppien kesken. Nämä havainnot korostavat MML-1-solulinjan hyödyllisyyttä melanooman molekyylimekanismien tutkimisessa, erityisesti siinä, miten kasvainsolut kommunikoivat EV:iden välityksellä ja vaikuttavat mikroympäristöönsä.

Kudos
Iho
Sairaus
Melanooma
Synonyymit
  • MML1

02Luokittelu

Organismi
Ihminen
Sukupuoli
Määrittelemätön
Kasvuominaisuudet
Kiinnittynyt
Bioturvallisuustaso
1

03Ominaisuudet

Morfologia
Epiteelin kaltainen
Kasvaimia aiheuttava
Kyllä, alastomilla hiirillä

04Tunnisteet

Lähdeviite
MML-1 (Cytionin luettelonumero 300288)
NCBI-verotunnus
9606
Cellosaurus
CVCL_6004

05Ilmentyminen ja alttius

Proteiinin ilmentyminen
P53-positiivinen
Mutaatioprofiili
V600E-tyyppinen BRAF-mutaatio määritettiin DNA-pohjaisilla menetelmillä (sekvensointi, RT-PCR) ja proteiinipohjaisilla menetelmillä (Western Blot).
Käänteiskopioijaentsyymi
Negatiivinen

06Käsittely ja viljely

Viljelyalusta
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiilia glutamiinia, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytionin artikkelinumero 820700a)
Inkubaatioilma

37 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä.

Ravintolisät
Täydennetään elatusainetta 10 %:lla FBS:llä
Dissosiaatioreagenssi
Accutase
Soluviljely
Poista vanha väliaine tarttuneista soluista ja pese ne PBS:llä, josta puuttuu kalsiumia ja magnesiumia. Käytä T25-pulloissa 3-5 ml PBS:ää ja T75-pulloissa 5-10 ml. Peitä sitten solut kokonaan Accutase-valmisteella, käyttäen 1-2 ml T25-pulloissa ja 2,5 ml T75-pulloissa. Anna solujen inkuboitua huoneenlämmössä 8-10 minuuttia solujen irtoamiseksi. Inkuboinnin jälkeen solut sekoitetaan varovasti 10 ml:n väliaineella niiden resuspendoimiseksi ja sentrifugoidaan sitten 300xg:n nopeudella 3 minuutin ajan. Hävitä supernatantti, suspendoi solut uudelleen tuoreeseen väliaineeseen ja siirrä ne uusiin pulloihin, jotka sisältävät jo tuoretta väliaineita.
Kylvötiheys
1 x 104 solua/cm2
Nesteen uusiminen
2-3 kertaa viikossa
Sulamisen jälkeinen palautuminen
Sulattamisen jälkeen levitä solut 5 x 104 solua/cm2 ja anna solujen toipua pakastusprosessista ja kiinnittyä vähintään 24 tunnin ajan.
Sulatus ja viljely
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Laadunvalvonta ja kryosäilytys

Hedelmättömyys

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Jäädytysaine
Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa (mukaan lukien FBS) + 10 % DMSO:ta riittävän sulatuksen jälkeisen elinkelpoisuuden varmistamiseksi tai CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytyksen aiheuttamaa stressiä.
Säilytysolosuhteet

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Toimitusehdot

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

08Lahjoittaja

Luovuttajan ikä
Määrittelemätön