Pereiti prie turinio
MML-1
Audinys
Odos
Liga
Melanoma
Sinonimai
MML1

Dokumentai

MML-1

Cell line · Prekės numeris 300288

MML-1 ląstelių linija yra iš piktybinės melanomos išskirta melanomos ląstelių linija. Ši ląstelių linija daugiausia naudojama melanomos biologijai tirti, ypač...

€800.00neįskaitant mokesčių ir pristatymo išlaidų

Pritaikymas / Rekomendacijos

Yra sandėlyje
Lot
Rekomenduojama (šviežiausia partija)
1

01Bendra informacija

Aprašymas

MML-1 ląstelių linija yra melanomos ląstelių linija, gauta iš piktybinės melanomos. Ši ląstelių linija pirmiausia naudojama melanomos biologijai tirti, ypač ekstraląstelinių vezikulių (EV) vaidmeniui ląstelių tarpusavio ryšyje ir naviko progresavime. MML-1 ląstelės išskiria įvairių potipių EV, įskaitant egzosomas, mikrovezikules ir apoptozinius kūnelius, kurių kiekviename yra skirtingi RNR kroviniai, pavyzdžiui, mikro RNR (miRNA) ir kitos nekoduojančios RNR.

Tyrimai, atlikti naudojant MML-1 ląsteles, parodė, kad iš šių ląstelių išsiskiriančiose egzosomose yra specifinių miRNA, tokių kaip miR-214-3p, miR-199a-3p ir miR-155-5p, kurios yra glaudžiai susijusios su melanomos progresavimu ir metastazėmis. Šių miRNA yra daugiau egzosomose, palyginti su kitų tipų EV, ir jos yra susijusios su svarbiais su melanoma susijusiais keliais, tokiais kaip MAPK signalinio kelio reguliavimas ir naviko mikroaplinkos sąveika. Įdomu tai, kad lyginant MML-1 išvestų egzosomų miRNA profilius su klinikiniais melanomos mėginiais, jie labai sutampa, o tai rodo šio ląstelių modelio klinikinę reikšmę melanomos progresavimo supratimui.

MML-1 ląstelės išskiria ne tik miRNA, bet ir kitas nekoduojančias RNR, pavyzdžiui, mažąsias branduolio RNR (snoRNA) ir su mitochondrijais susijusias transferines RNR (mt-RNA), kurios skirtingai pasiskirsto tarp EV potipių. Šios išvados rodo, kad MML-1 ląstelių linija yra naudinga tiriant melanomos molekulinius mechanizmus, ypač tai, kaip naviko ląstelės bendrauja per EV ir daro įtaką savo mikroaplinkai.

Audinys
Odos
Liga
Melanoma
Sinonimai
  • MML1

02Klasifikacija

Organizmas
Žmogus
Seksas
Nenurodyta
Augimo savybės
Prisijungęs
Biologinio saugumo lygis
1

03Charakteristikos

Morfologija
Į epitelį panašus
Tumorogeninis
Taip, su nuogomis pelėmis

04Identifikatoriai

Nuoroda
MML-1 (Cytion katalogo numeris 300288)
NCBI mokesčių identifikavimo kodas
9606
Cellosaurus
CVCL_6004

05Išraiška ir jautrumas

Baltojų baltymų ekspresija
P53 teigiamas
Mutacijų profilis
V600E tipo BRAF mutacija buvo nustatyta DNR metodais (sekos nustatymas, RT-PCR) ir baltymų metodais (Western Blot).
Atvirkštinė transkriptazė
Neigiamas

06Laikymas ir auginimas

Maitinamoji terpė
RPMI 1640, š: 2,0 mM stabilus glutaminas, š: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion gaminio numeris 820700a)
Inkubacijos aplinka

37 °C, 5 %CO2, drėkintoje atmosferoje.

Maisto papildai
Papildykite terpę 10 % FBS
Disociacijos reagentas
Accutase
Subkultūrinis auginimas
Pašalinkite seną terpę nuo prilipusių ląstelių ir nuplaukite jas PBS, kuriame nėra kalcio ir magnio. T25 kolboms naudokite 3-5 ml PBS, o T75 kolboms - 5-10 ml. Tuomet visiškai užpilkite ląsteles "Accutase", naudodami 1-2 ml T25 kolboms ir 2,5 ml T75 kolboms. Leiskite ląstelėms inkubuotis kambario temperatūroje 8-10 minučių, kad jos atsiskirtų. Po inkubacijos atsargiai sumaišykite ląsteles su 10 ml terpės, kad jos vėl suspenduotų, tada 3 minutes centrifuguokite 300xg greičiu. Išmeskite supernatantą, vėl sutirpinkite ląsteles šviežioje terpėje ir perkelkite jas į naujas kolbas, kuriose jau yra šviežia terpė.
Sėjos tankis
1 x 104 ląstelės/cm2
Skysčių atnaujinimas
2-3 kartus per savaitę
Atkūrimas po atšilimo
Atšildžius, išdėliokite ląsteles 5 x 104 ląstelių/cm2 tankumu ir leiskite ląstelėms atsigauti po užšaldymo proceso ir prisitvirtinti bent 24 valandas.
Atšildymas ir auginimas
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kokybės kontrolė ir kriokonservavimas

Sterilumas

Mikoplazmos užterštumas atmetamas taikant PGR pagrįstus tyrimus ir liuminescencinius mikoplazmos aptikimo metodus.

Siekiant užtikrinti, kad nebūtų užteršimo bakterijomis, grybeliais ar mielėmis, ląstelių kultūros kasdien vizualiai tikrinamos.

Šaldymo terpė
Kaip kriokonservavimo terpę naudojame visišką augimo terpę (įskaitant FBS) + 10 % DMSO, kad būtų užtikrintas tinkamas gyvybingumas po atšildymo, arba CM-1 (Cytion katalogo numeris 800100), kurioje yra optimizuotų osmoprotektorių ir medžiagų apykaitos stabilizatorių, kad būtų pagerintas atsigavimas ir sumažintas kriokonservavimo sukeltas stresas.
Laikymo sąlygos

Norėdami ilgai saugoti, įdėkite buteliukus į garų fazės skystą azotą maždaug -150-196 °C temperatūroje. Laikymas -80 °C temperatūroje yra priimtinas tik kaip trumpas tarpinis etapas prieš perkeliant į skystąjį azotą.

Pristatymo sąlygos

Kriokonservuotos ląstelių linijos gabenamos ant sauso ledo patvirtintoje, izoliuotoje pakuotėje su pakankamu kiekiu šaldymo skysčio, kad pervežimo metu būtų palaikoma maždaug -78 °C temperatūra. Gavę pakuotę, nedelsdami ją apžiūrėkite ir nedelsdami perkelkite mėgintuvėlius į tinkamą saugyklą.

08Donoras

Donoro amžius
Nenustatyta