Премини към съдържанието
OP9
Тъкан
Костен мозък, строма
Синоними
OP-9

Документи

OP9

Cell line · Номер на продукта 305174

The OP9 cell line, a stromal cell line derived from the calvariae of op/op mice, has a mutation that leads to a lack of macrophage colony-stimulating fact...

€430.00без ДДС и доставка

Персонализиране / Препоръки

На склад
Лот
Препоръчани (най-новата партида)
  • CoA
1

01Обща информация

Описание

Клетъчната линия OP9, стромална клетъчна линия, получена от калвариите на мишки op/op, има мутация, която води до липса на фактор, стимулиращ колониите на макрофагите (M-CSF), който е критичен цитокин, участващ в диференциацията, оцеляването и функцията на различни клетъчни типове, включително макрофаги и остеокласти.

Клетките OP9 се използват широко в областта на изследванията на хемопоезата като захранващи слоеве в системи за ко-култивиране, за да подпомогнат диференциацията и експанзията както на хемопоетични стволови клетки (ХСК), така и на ембрионални стволови клетки (ЕСК). Тези системи за съвместно култивиране улесниха изследването на пътищата на хемопоетична диференциация, като позволиха на МСК да се диференцират в еритроидни клетки, еритробласти и червени кръвни клетки за възрастни, както и в остеоцити, хондроцити, миоцити, теноцити и адипоцити. Подкрепящата роля на клетките на OP9 в тези системи се дължи на способността им да създават благоприятна микросреда, богата на цитокини и растежни фактори, които са от съществено значение за пролиферацията на стволовите клетки и специфичната диференциация на линиите.

Освен това клетъчната линия OP9 е от съществено значение за изучаване на реакцията на левкоцитите и развитието на имунни клетки, като например клетките естествени убийци (NK), което показва полезността на мишката линия OP9 в имунологичните изследвания. Секреторните фактори, произвеждани от клетките на OP9, включително растежни фактори като bFGF, IGF-1, IL-3, PDGF-BB, TGF-β1 и TGF-β3, играят решаваща роля в процесите на клетъчна миграция и диференциация.

Клетките OP9 имат фибробластна форма, характеризираща се с вретеновидна, плоска морфология. Тази морфологична особеност е типична за мезенхимните стромални клетки, които са известни с поддържащите си функции в микросредата на костния мозък.

Въпреки големия си потенциал клетките OP9 имат ограничения, дължащи се на тяхната неимурнализирана природа, което ограничава използването им до краткосрочни и малки проекти, подчертавайки необходимостта от внимателно планиране и обмисляне на експерименталните проекти.

Тъкан
Костен мозък, строма
Синоними
  • OP-9

02Класификация

Организъм
Мишка
Свойства, свързани с растежа
Привърженик
Ниво на биологична безопасност
1

03Характеристики

Морфология
Подобни на фибробласти

04Идентификатори

Източник
OP9 (каталожен номер на Cytion 305174)
Данъчен идентификационен номер в NCBI
10090
Целозавър
CVCL_4398

05Обработка и отглеждане

Хранителна среда
Alpha MEM, w: 2,0 mM стабилен глутамин, w/o: Рибонуклеозиди, w/o: Дезоксирибонуклеозиди, w: 1,0 mM Натриев пируват, w: 2,2 g/L NaHCO3
Атмосфера за инкубация

37°C, 5%CO2, овлажнена атмосфера.

Добавки
Допълнете средата с 20% FBS
Реагент за дисоциация
Accutase
Пресаждане
Отстранете старата среда от адхезивните клетки и ги промийте с PBS, която не съдържа калций и магнезий. За колби Т25 използвайте 3-5 ml PBS, а за колби Т75 - 5-10 ml. След това покрийте клетките изцяло с Accutase, като използвате 1-2 ml за колби Т25 и 2,5 ml за колби Т75. Оставете клетките да се инкубират на стайна температура за 8-10 минути, за да се отделят. След инкубацията внимателно разбъркайте клетките с 10 ml среда, за да ги ресуспендирате, след което центрофугирайте при 300xg за 3 минути. Изхвърлете супернатантата, ресуспендирайте клетките в прясна среда и ги прехвърлете в нови колби, които вече съдържат прясна среда.
Обновяване на течността
2 до 3 пъти седмично
Размразяване и култивиране
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Контрол на качеството и криоконсервация

Стерилност

Замърсяването с микоплазма се изключва както чрез PCR-базирани анализи, така и чрез луминесцентни методи за откриване на микоплазма.

За да се гарантира, че няма бактериално, гъбично или дрождево замърсяване, клетъчните култури се подлагат на ежедневни визуални проверки.

Среда за замразяване
Като среда за криоконсервация използваме пълна среда за растеж (включително FBS) + 10% DMSO за адекватна жизнеспособност след размразяване или CM-1 (каталожен номер 800100 на Cytion), която включва оптимизирани осмопротектори и метаболитни стабилизатори за подобряване на възстановяването и намаляване на криоиндуцирания стрес.
Условия за съхранение

За дълготрайно съхранение поставете флаконите в течен азот в парна фаза при температура около -150 до -196 °C. Съхранението при -80 °C е приемливо само като кратък междинен етап преди прехвърлянето в течен азот.

Условия за доставка

Криоконсервираните клетъчни линии се транспортират върху сух лед в утвърдени, изолирани опаковки с достатъчно хладилен агент, за да се поддържа приблизително -78 °C по време на транспортирането. При получаването незабавно прегледайте опаковката и незабавно прехвърлете флаконите за подходящо съхранение.

07Дарител

Порода / подвид
(C57BL/6 x C3H) F2-op/op
Възраст на донора
Ембрион