Gå til innholdet
OP9
Vev
Benmarg, stroma
Synonymer
OP-9

Dokumenter

OP9

Cell line · Produktnummer 305174

The OP9 cell line, a stromal cell line derived from the calvariae of op/op mice, has a mutation that leads to a lack of macrophage colony-stimulating fact...

€430.00ekskl. mva. og frakt

Tilpasning / Anbefalinger

På lager
Lot
Anbefalt (det ferskeste partiet)
  • CoA
1

01Generell informasjon

Beskrivelse

OP9-cellelinjen, en stromal cellelinje avledet fra kalvariene til op/op-mus, har en mutasjon som fører til mangel på makrofagkolonistimulerende faktor (M-CSF), som er et kritisk cytokin som er involvert i differensiering, overlevelse og funksjon av ulike celletyper, inkludert makrofager og osteoklaster.

OP9-celler har blitt mye brukt i forskning på hematopoiese som materlag i samdyrkingssystemer for å støtte differensiering og ekspansjon av både hematopoietiske stamceller (HSC) og embryonale stamceller (ESC). Disse samdyrkingssystemene har gjort det enklere å studere hematopoietiske differensieringsveier, slik at MSC kan differensiere til voksne erytroide celler, erytroblaster og røde blodlegemer samt osteocytter, kondrocytter, myocytter, tenocytter og adipocytter. OP9-cellenes støttende rolle i disse systemene tilskrives deres evne til å produsere et gunstig mikromiljø som er rikt på cytokiner og vekstfaktorer som er essensielle for stamcelleproliferasjon og linjespesifikk differensiering.

OP9-cellelinjen er dessuten viktig for å studere leukocyttreaksjonen og utviklingen av immunceller som naturlige dreperceller (NK-celler), noe som demonstrerer OP9-muselinjens nytteverdi i immunologisk forskning. De sekretoriske faktorene som produseres av OP9-celler, inkludert vekstfaktorer som bFGF, IGF-1, IL-3, PDGF-BB, TGF-β1 og TGF-β3, spiller en avgjørende rolle i cellemigrasjon og differensieringsprosesser.

OP9-celler har et fibroblastlignende utseende, kjennetegnet av en spindelformet, flat morfologi. Dette morfologiske trekket er typisk for mesenkymale stromaceller, som er kjent for sine støttende funksjoner i benmargens mikromiljø.

Til tross for det store potensialet OP9-celler har, har de begrensninger på grunn av at de ikke er udødeliggjorte, noe som begrenser bruken av dem til kortvarige og småskalaprosjekter, noe som understreker behovet for nøye planlegging og overveielse av forsøksdesign.

Vev
Benmarg, stroma
Synonymer
  • OP-9

02Klassifisering

Organisme
Mus
Vekstegenskaper
Tilhenger
Biosikkerhetsnivå
1

03Egenskaper

Morfologi
Fibroblastlignende

04Identifikatorer

Kildehenvisning
OP9 (Cytion-katalognummer 305174)
NCBI-skattenummer
10090
Cellosaurus
CVCL_4398

05Håndtering og kultur

Næringsmedium
Alpha MEM, m: 2,0 mM stabilt glutamin, uten: Ribonukleosider, m/o: Deoksyribonukleosider, m: 1,0 mM Natriumpyruvat, m: 2,2 g/L NaHCO3
Inkubasjonsatmosfære

37 °C, 5 %CO2, befuktet atmosfære.

Kosttilskudd
Suppler mediet med 20 % FBS
Dissosiasjonsmiddel
Accutase
Subkultivering
Fjern det gamle mediet fra de adherente cellene, og vask dem med PBS uten kalsium og magnesium. Bruk 3-5 ml PBS for T25-kolber og 5-10 ml for T75-kolber. Dekk deretter cellene helt med Accutase, med 1-2 ml for T25-kolber og 2,5 ml for T75-kolber. La cellene inkubere i romtemperatur i 8-10 minutter for å løsne dem. Etter inkubasjon blandes cellene forsiktig med 10 ml medium for å resuspendere dem, og sentrifuger deretter ved 300xg i 3 minutter. Kast supernatanten, resuspender cellene i nytt medium, og overfør dem til nye kolber som allerede inneholder nytt medium.
Væskefornyelse
2 til 3 ganger per uke
Tining og dyrking
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kvalitetskontroll og kryokonservering

Sterilitet

Mykoplasma-kontaminering utelukkes ved hjelp av både PCR-baserte analyser og luminescensbaserte metoder for påvisning av mykoplasma.

For å sikre at det ikke finnes bakterie-, sopp- eller gjærkontaminering, blir cellekulturene inspisert visuelt hver dag.

Frysemedium
Som kryopreserveringsmedium bruker vi komplett vekstmedium (inkludert FBS) + 10 % DMSO for tilstrekkelig levedyktighet etter opptining, eller CM-1 (Cytion-katalognummer 800100), som inneholder optimaliserte osmobeskyttende midler og metabolske stabilisatorer for å øke utvinningen og redusere kryoindusert stress.
Oppbevaringsbetingelser

For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.

Fraktvilkår

Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.

07Donor

Rase / underart
(C57BL/6 x C3H) F2-op/op
Donorens alder
Embryo