OP9

A linhagem celular OP9, uma linhagem de células estromais derivada da calvária de camundongos op/op, apresenta uma mutação que leva à ausência do fator estimulador de colônias de macrófagos (M-CSF), que é uma citocina essencial envolvida na diferenciação, sobrevivência e função de vários tipos de células, incluindo macrófagos e osteoclastos.

As células OP9 têm sido amplamente utilizadas no campo da pesquisa em hematopoiese como camadas alimentadoras em sistemas de cocultura para apoiar a diferenciação e a expansão tanto de células-tronco hematopoiéticas (HSCs) quanto de células-tronco embrionárias (ESCs). Esses sistemas de cocultura facilitaram o estudo das vias de diferenciação hematopoiética, permitindo que as MSCs se diferenciem em células eritroides adultas, eritroblastos e hemácias, bem como em osteócitos, condrócitos, miócitos, tenócitos e adipócitos. O papel de suporte das células OP9 nesses sistemas é atribuído à sua capacidade de produzir um microambiente propício, rico em citocinas e fatores de crescimento essenciais para a proliferação das células-tronco e a diferenciação específica de cada linhagem.

Além disso, a linhagem celular OP9 é fundamental para o estudo da reação leucocitária e do desenvolvimento de células imunes, como as células natural killer (NK), demonstrando a utilidade da linhagem de camundongos OP9 na pesquisa imunológica. Os fatores secretórios produzidos pelas células OP9, incluindo fatores de crescimento como bFGF, IGF-1, IL-3, PDGF-BB, TGF-β1 e TGF-β3, desempenham um papel crítico nos processos de migração e diferenciação celular.

As células OP9 apresentam uma aparência semelhante à dos fibroblastos, caracterizada por uma morfologia achatada e fusiforme. Essa característica morfológica é típica das células estromais mesenquimais, conhecidas por suas funções de suporte no microambiente da medula óssea.

Apesar de seu vasto potencial, as células OP9 apresentam limitações devido à sua natureza não imortalizada, o que restringe seu uso a projetos de curto prazo e em pequena escala, ressaltando a necessidade de um planejamento cuidadoso e de considerações criteriosas nos desenhos experimentais.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.