Ga naar de inhoud
OP9
Weefsel
Beenmerg, stroma
Synoniemen
OP-9

Documenten

OP9

Cell line · Productnummer 305174

The OP9 cell line, a stromal cell line derived from the calvariae of op/op mice, has a mutation that leads to a lack of macrophage colony-stimulating fact...

€430.00excl. btw en verzendkosten

Maatwerk / Aanbevelingen

Op voorraad
Lot
Aanbevolen (verste partij)
  • CoA
1

01Algemene informatie

Beschrijving

De OP9-cellijn, een stromale cellijn afkomstig van de calvariae van op/op muizen, heeft een mutatie die leidt tot een gebrek aan macrofaagkoloniestimulerende factor (M-CSF), een essentieel cytokine dat betrokken is bij de differentiatie, overleving en functie van verschillende celtypen, waaronder macrofagen en osteoclasten.

OP9-cellen zijn op grote schaal gebruikt bij onderzoek naar hematopoëse als voedingslagen in co-cultuursystemen om de differentiatie en expansie van zowel hematopoëtische stamcellen (HSC's) als embryonale stamcellen (ESC's) te ondersteunen. Deze co-cultuursystemen hebben de studie van hematopoëtische differentiatiepaden vergemakkelijkt, waardoor MSCs konden differentiëren in volwassen erytroïde cellen, erytroblasten en rode bloedcellen en osteocyten, chondrocyten, myocyten, tenocyten en adipocyten. De ondersteunende rol van OP9 cellen in deze systemen wordt toegeschreven aan hun vermogen om een gunstige micro-omgeving te produceren die rijk is aan cytokinen en groeifactoren die essentieel zijn voor stamcelproliferatie en lineage-specifieke differentiatie.

Verder is de OP9 cellijn instrumenteel in het bestuderen van de leukocytenreactie en de ontwikkeling van immuuncellen zoals natural killer (NK) cellen, wat het nut van de OP9 muislijn in immunologisch onderzoek aantoont. De secretoire factoren geproduceerd door OP9 cellen, inclusief groeifactoren zoals bFGF, IGF-1, IL-3, PDGF-BB, TGF-β1 en TGF-β3, spelen een cruciale rol in celmigratie en differentiatieprocessen.

OP9 cellen vertonen een fibroblastachtig uiterlijk, gekenmerkt door een spoelvormige, platte morfologie. Deze morfologische eigenschap is typerend voor mesenchymale stromale cellen, die bekend staan om hun ondersteunende functies in de beenmergmicro-omgeving.

Ondanks hun enorme potentieel hebben OP9 cellen beperkingen vanwege hun niet-geïmmortaliseerde aard, waardoor ze alleen gebruikt kunnen worden voor kortlopende en kleinschalige projecten.

Weefsel
Beenmerg, stroma
Synoniemen
  • OP-9

02Classificatie

Organisme
Muis
Groei-eigenschappen
Aanhanger
Bioveiligheidsniveau
1

03Kenmerken

Morfologie
Fibroblast-achtige

04Identificatiegegevens

Bronvermelding
OP9 (Cytion catalogusnummer 305174)
NCBI-belastingnummer
10090
Cellosaurus
CVCL_4398

05Behandeling en kweek

Kweekmedium
Alpha MEM, w: 2,0 mM stabiele Glutamine, w/o: Ribonucleosiden, w/o: Deoxyribonucleosiden, w: 1,0 mM Natriumpyruvaat, w: 2,2g/L NaHCO3
Incubatieomgeving

37°C, 5%CO2, bevochtigde atmosfeer.

Supplementen
Vul het medium aan met 20% FBS
Dissociatiereagens
Accutase
Heruitplanten
Verwijder het oude medium van de adherente cellen en was ze met PBS zonder calcium en magnesium. Gebruik voor T25-flesjes 3-5 ml PBS en voor T75-flesjes 5-10 ml. Bedek de cellen vervolgens volledig met Accutase, met 1-2 ml voor T25-flesjes en 2,5 ml voor T75-flesjes. Laat de cellen gedurende 8-10 minuten bij kamertemperatuur incuberen om ze los te maken. Na incubatie de cellen voorzichtig mengen met 10 ml medium om ze te resuspenderen en vervolgens centrifugeren bij 300xg gedurende 3 minuten. Gooi het supernatant weg, resuspendeer de cellen in vers medium en breng ze over in nieuwe kolven die al vers medium bevatten.
Vloeistofverversing
2 tot 3 keer per week
Ontdooien en kweken
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kwaliteitscontrole en cryopreservatie

Onvruchtbaarheid

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.

Kweekmedium invriezen
Als cryoconserveringsmedium gebruiken we volledig groeimedium (inclusief FBS) + 10% DMSO voor voldoende levensvatbaarheid na het ontdooien, of CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100), dat geoptimaliseerde osmoprotectanten en metabolische stabilisatoren bevat om het herstel te verbeteren en door cryo geïnduceerde stress te verminderen.
Opslagvoorwaarden

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Verzendvoorwaarden

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.

07Donateur

Soort / ondersoort
(C57BL/6 x C3H) F2-op/op
Leeftijd van de donor
Embryo