Prejsť na obsah
OP9
Tkanivo
Kostná dreň, stróma
Synonymá
OP-9

Dokumenty

OP9

Cell line · Číslo výrobku 305174

The OP9 cell line, a stromal cell line derived from the calvariae of op/op mice, has a mutation that leads to a lack of macrophage colony-stimulating fact...

€430.00bez DPH a poštovného

Prispôsobenie / Odporúčania

Na sklade
Lot
Odporúčané (najčerstvejšia várka)
  • CoA
1

01Všeobecné informácie

Popis

Bunková línia OP9, stromálna bunková línia odvodená z kalvárií op/op myší, má mutáciu, ktorá vedie k nedostatku faktora stimulujúceho kolónie makrofágov (M-CSF), čo je kritický cytokín, ktorý sa podieľa na diferenciácii, prežívaní a funkcii rôznych typov buniek vrátane makrofágov a osteoklastov.

Bunky OP9 sa vo veľkej miere používajú v oblasti výskumu krvotvorby ako napájacie vrstvy v kokultúrnych systémoch na podporu diferenciácie a expanzie hematopoetických kmeňových buniek (HSC) aj embryonálnych kmeňových buniek (ESC). Tieto kokultúrne systémy uľahčili štúdium hematopoetických diferenciačných dráh a umožnili MSC diferencovať sa na dospelé erytroidné bunky, erytroblasty a červené krvinky a osteocyty, chondrocyty, myocyty, tenocyty a adipocyty. Podporná úloha buniek OP9 v týchto systémoch sa pripisuje ich schopnosti vytvárať priaznivé mikroprostredie bohaté na cytokíny a rastové faktory nevyhnutné pre proliferáciu kmeňových buniek a diferenciáciu špecifickú pre jednotlivé línie.

Okrem toho je bunková línia OP9 užitočná pri štúdiu reakcie leukocytov a vývoja imunitných buniek, ako sú prirodzené zabíjačské bunky (NK), čo dokazuje užitočnosť myšej línie OP9 v imunologickom výskume. Sekrečné faktory produkované bunkami OP9 vrátane rastových faktorov, ako sú bFGF, IGF-1, IL-3, PDGF-BB, TGF-β1 a TGF-β3, zohrávajú rozhodujúcu úlohu v procesoch migrácie a diferenciácie buniek.

Bunky OP9 vykazujú vzhľad podobný fibroblastom, charakterizovaný vretenovitou, plochou morfológiou. Tento morfologický znak je typický pre mezenchymálne stromálne bunky, ktoré sú známe svojimi podpornými funkciami v mikroprostredí kostnej drene.

Napriek svojmu obrovskému potenciálu majú bunky OP9 obmedzenia vyplývajúce z ich neimortalizovanej povahy, čo obmedzuje ich použitie na krátkodobé a malé projekty, čo zdôrazňuje potrebu starostlivého plánovania a zváženia pri navrhovaní experimentov.

Tkanivo
Kostná dreň, stróma
Synonymá
  • OP-9

02Klasifikácia

Organizmus
Myš
Rastové vlastnosti
Prívrženec
Úroveň biologickej bezpečnosti
1

03Charakteristiky

Morfológia
Fibroblastom podobné

04Identifikátory

Citácia
OP9 (katalógové číslo Cytion 305174)
Daňové identifikačné číslo NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_4398

05Manipulácia a kultivácia

Kultivačné médium
Alpha MEM, w: 2,0 mM stabilný glutamín, w/o: Ribonukleozidy, w/o: Deoxyribonukleozidy, w: 1,0 mM Pyruvát sodný, w: 2,2 g/l NaHCO3
Inkubačná atmosféra

37 °C, 5 %CO2, zvlhčená atmosféra.

Doplnky stravy
Doplňte médium o 20 % FBS
Disociačné činidlo
Accutase
Rozmnožovanie kultúr
Odstráňte staré médium z adherovaných buniek a premyte ich PBS, ktorý neobsahuje vápnik a horčík. Pre banky T25 použite 3 - 5 ml PBS a pre banky T75 použite 5 - 10 ml. Potom bunky úplne pokryte Accutase, pričom použite 1 - 2 ml pre banky T25 a 2,5 ml pre banky T75. Nechajte bunky inkubovať pri izbovej teplote 8-10 minút, aby sa oddelili. Po inkubácii jemne premiešajte bunky s 10 ml média, aby boli znovu suspendované, a potom ich 3 minúty odstreďujte pri 300xg. Supernatant zlikvidujte, bunky znovu rozmiešajte v čerstvom médiu a preneste ich do nových fliaš, ktoré už obsahujú čerstvé médium.
Obnova kvapaliny
2 až 3-krát týždenne
Rozmrazovanie a kultivácia
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kontrola kvality a kryokonzervácia

Sterilita

Kontaminácia mykoplazmami sa vylučuje pomocou testov založených na PCR a metód detekcie mykoplaziem založených na luminiscencii.

Aby sa zabezpečilo, že nedošlo ku kontaminácii baktériami, hubami alebo kvasinkami, bunkové kultúry sa denne vizuálne kontrolujú.

Mrazové médium
Ako kryokonzervačné médium používame kompletné rastové médium (vrátane FBS) + 10 % DMSO na zabezpečenie primeranej životaschopnosti po rozmrazení alebo CM-1 (katalógové číslo 800100 spoločnosti Cytion), ktoré obsahuje optimalizované osmoprotektanty a metabolické stabilizátory na zlepšenie obnovy a zníženie stresu spôsobeného kryo.
Podmienky skladovania

Na dlhodobé uchovávanie umiestnite injekčné liekovky do kvapalnej fázy dusíka v pare pri teplote približne -150 až -196 °C. Skladovanie pri teplote -80 °C je prijateľné len ako krátky prechodný krok pred presunom do tekutého dusíka.

Dopravné podmienky

Kryokonzervované bunkové línie sa prepravujú na suchom ľade v overených, izolovaných obaloch s dostatočným množstvom chladiva na udržanie teploty približne -78 °C počas celej prepravy. Po prijatí ihneď skontrolujte obal a bezodkladne premiestnite injekčné liekovky do vhodného skladu.

07Darca

Plemeno / poddruh
(C57BL/6 x C3H) F2-op/op
Vek darcu
Embryo