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B-LCL-HROG02
Gewebe
Peripheres Blut
Krankheit
EBV-transformierte B-Lymphoblastoid-Zelllinie (B-LCL); Spender mit Magenkrebs

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B-LCL-HROG02

Cell line · Artikelnummer 302106

B-LCL-HROG02 is a human Epstein-Barr virus (EBV)-transformed B lymphoblastoid cell line (B-LCL) established from the peripheral blood of a 68-year-old Cau...

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Auftragsfertigung
1

01Allgemeine Informationen

Beschreibung

B-LCL-HROG02 ist eine durch das humane Epstein-Barr-Virus (EBV) transformierte B-Lymphoblastoid-Zelllinie (B-LCL), die aus dem peripheren Blut eines 68-jährigen kaukasischen männlichen Magenkrebspatienten im Rahmen der HROG-Biobank-Serie etabliert wurde, dem Magenkrebs-Pendant zur HROC-B-LCL-Sammlung für kolorektalen Krebs. Die EBV-vermittelte In-vitro-Immortalisierung primärer B-Lymphozyten aus peripherem Blut führte zu einer stabil proliferierenden Suspensionszelllinie mit lymphoblastenähnlicher Morphologie. HROG02-Zellen exprimieren konstitutiv EBV-Latenzantigene (EBNA-1, -2, -3, LMP-1, -2) sowie hohe Konzentrationen an HLA-Molekülen der Klassen I und II, den kostimulatorischen Molekülen CD80 und CD86, den Adhäsionsmolekülen CD54 und CD58 und den B-Zell-Markern CD19, CD20 und CD23.

B-LCL-HROG02 wird in Funktionsassays für T- und NK-Zellen, bei der HLA-Typisierung, bei gemischten Lymphozytenreaktionen, in Studien zur Antigenpräsentation sowie in Protokollen zur Induktion zytotoxischer T-Zellen (CTL) eingesetzt. Innerhalb der patientenbezogenen HROG-Biobank stellt sie eine definierte immunologische Referenz für die Magenkrebsforschung dar und ermöglicht autologe oder allogene Untersuchungen tumorassoziierter Immunantworten. Die Zelllinie unterstützt Untersuchungen zur magenkrebsspezifischen T-Zell-Reaktivität sowie patientenbezogene Immuntestsysteme, die für die Immunologie von Magentumoren relevant sind.

Gewebe
Peripheres Blut
Krankheit
EBV-transformierte B-Lymphoblastoid-Zelllinie (B-LCL); Spender mit Magenkrebs
Anwendungen
Immunologische Forschung; T-Zell- und NK-Zell-Assays; HLA-Typisierung; Untersuchungen zur Antigenpräsentation; gemischte Lymphozytenreaktionen; Zielzellen für CTL-Assays; Immunologie des Magenkrebses

02Klassifizierung

Organismus
Mensch
Sex
Männlich
Wachstumseigenschaften
Aussetzung
GVO-Status
GMO-S2
Angaben zum GVO-Status
GMO-S2: This B-LCL contains a stably maintained EBV episome encoding viral latent-phase genes (EBNA-1/-2/-3, LMP-1/-2). EBV is classified as a risk group 2 pathogen. Handling requires BSL-2 containment. This classification applies within Germany; regulations may differ in other jurisdictions.
Biologische Sicherheitsstufe
2

03Merkmale

Morphologie
Lymphoblasten-ähnlich
Zelltyp
B-Lymphoblasten
Verdopplungszeit
24 bis 48 Stunden

04Bezeichner

Quellenangabe
B-LCL-HROG02 (Cytion-Katalognummer 302106)
NCBI-Steuer-ID
9606

05Expression und Anfälligkeit

Viren
Transformant: EBV

06Handhabung und Kultur

Nährmedium
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiles Glutamin, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion-Artikelnummer 820700a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Das Medium mit 15–20 % FBS ergänzen
Subkultivierung
Verdünnen Sie die Kultur alle 2–3 Tage mit frischem, vorgewärmtem Komplettmedium auf 2–5 × 10⁵ Zellen/ml. Zählen Sie vor der Passagierung die lebensfähigen Zellen, um eine optimale Zelldichte aufrechtzuerhalten. Die Zelldichte der Kulturen sollte 2 × 10⁶ Zellen/ml nicht überschreiten. Bei Bedarf kann das Medium durch Zentrifugation (300 × g, 5 min) ausgetauscht werden. Eine enzymatische Dissoziation ist nicht erforderlich.
Split-Verhältnis
1 bis 4
Aussaatdichte
2 bis 5 × 10⁵ Zellen/ml
Flüssigkeitswechsel
Alle 2 bis 3 Tage
Auftauen und Kultivierung

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

  7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

07Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir vollständiges Wachstumsmedium + 10 % DMSO, um eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen zu gewährleisten.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

08Spender

Alter des Spenders
68 Jahre
Ethnische Zugehörigkeit
Kaukasisch