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Kera-308
Pañuelo de papel
Piel
Enfermedad
Papiloma de la piel de ratón
Sinónimos
KERA-308, 308, Line 308

Documentos

Kera-308

Cell line · Número de producto 400429

The Kera-308 cell line, established from adult mouse skin keratinocytes, offers a versatile model for studying the intricate processes of skin physiology,...

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01Información general

Descripción

La línea celular Kera-308, establecida a partir de queratinocitos de piel de ratón adulto, ofrece un modelo versátil para estudiar los intrincados procesos de la fisiología cutánea, en particular la cicatrización de heridas y la función de los queratinocitos. Esta línea celular demuestra una notable capacidad para regular al alza la expresión de queratinas, incluidos tipos de queratinas inducidas por heridas como Krt6a, en condiciones específicas como el tratamiento con extracto de raíz de Morus alba. La capacidad de respuesta de las células Kera-308 al forbol 12-miristato 13-acetato (PMA) pone de relieve su utilidad para investigar los mecanismos celulares que subyacen a la reparación y regeneración de la piel.

Una característica destacada de las células Kera-308 es su respuesta de proliferación dependiente de la dosis, que puede aumentar significativamente con estímulos externos como el extracto de raíz de Morus alba. Esta característica hace de Kera-308 una herramienta excelente para sondear los fundamentos moleculares de la proliferación y diferenciación de queratinocitos en respuesta a agentes terapéuticos.

Por otra parte, el perfil transcripcional de las células Kera-308 en escenarios de cicatrización de heridas, en particular su filamento de queratina regulado al alza y la señalización CXCL12/CXCR4, proporciona información muy valiosa sobre la dinámica celular y molecular en juego durante la reparación de la piel. La implicación de estas vías de señalización subraya la importancia de las células Kera-308 en la exploración de nuevas estrategias terapéuticas para mejorar la cicatrización de heridas y tratar trastornos cutáneos.

Pañuelo de papel
Piel
Enfermedad
Papiloma de la piel de ratón
Sinónimos
  • KERA-308
  • 308
  • Line 308

02Clasificación

Organismo
Ratón
Propiedades de crecimiento
Adherente
Nivel de bioseguridad
1

03Características

Tipo de célula
Queratinocitos

04Identificadores

Referencia
Kera-308 (número de catálogo 400429 de Cytion)
N.º de identificación fiscal del NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_5782

05Manejo y cultivo

Medio de cultivo
DMEM, w: 4,5 g/L de glucosa, w: 4 mM de L-glutamina, w: 3,7 g/L de NaHCO3, w: 1,0 mM de piruvato sódico (número de artículo de Cytion 820300a)
Atmósfera de incubación

37°C, 5%CO2, atmósfera humidificada.

Suplementos
Complementar el medio con un 10% de FBS
Reactivo de disociación
TrypLE Express (Life Technologies)
Subcultivo
Eliminar el medio y enjuagar las células adheridas con PBS sin calcio ni magnesio (3-5 ml de PBS para T25, 5-10 ml para matraces de cultivo celular T75). Añadir Tryple Express (1-2 ml por T25, 2,5 ml por matraz de cultivo celular T75), la lámina celular debe cubrirse completamente. Incubar a 37 grados durante 15 minutos. Resuspender cuidadosamente las células con 10 ml de medio (utilizar un raspador celular si es necesario), centrifugar durante 5 min a 300xg, resuspender las células en medio fresco y dispensar en nuevos matraces que contengan medio fresco.
Densidad de siembra
1 x 104 células/cm2
Renovación de fluidos
de 2 a 3 veces por semana
Recuperación tras la descongelación
Después de descongelar, siembre las células a 5 x 104 células/cm2 y deje que las células se recuperen del proceso de congelación y se adhieran durante al menos 24 horas.
Descongelación y cultivo
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Control de calidad y criopreservación

Esterilidad

La contaminación por micoplasma se excluye utilizando tanto ensayos basados en la PCR como métodos de detección de micoplasma basados en la luminiscencia.

Para garantizar la ausencia de contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Medio de congelación
Como medio de criopreservación, utilizamos el medio de crecimiento completo (incluido FBS) + 10% DMSO para una viabilidad adecuada tras la descongelación, o CM-1 (número de catálogo 800100 de Cytion), que incluye osmoprotectores optimizados y estabilizadores metabólicos para mejorar la recuperación y reducir el estrés crioinducido.
Condiciones de almacenamiento

Para la conservación a largo plazo, colocar los viales en nitrógeno líquido en fase vapor a una temperatura aproximada de -150 a -196 °C. El almacenamiento a -80 °C sólo es aceptable como breve paso intermedio antes de la transferencia al nitrógeno líquido.

Condiciones de envío

Las líneas celulares crioconservadas se envían en hielo seco en envases validados y aislados con suficiente refrigerante para mantener aproximadamente -78 °C durante el tránsito. A la recepción, inspeccione el envase inmediatamente y transfiera los viales sin demora al almacenamiento adecuado.

07Donante

Raza / subespecie
BALB/c