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Kera-308
Tessuto
La pelle
Malattia
Papilloma della pelle di topo
Sinonimi
KERA-308, 308, Line 308

Documenti

Kera-308

Cell line · Codice prodotto 400429

The Kera-308 cell line, established from adult mouse skin keratinocytes, offers a versatile model for studying the intricate processes of skin physiology,...

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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare Kera-308, ottenuta da cheratinociti cutanei di topo adulto, offre un modello versatile per studiare gli intricati processi della fisiologia cutanea, in particolare la guarigione delle ferite e la funzione dei cheratinociti. Questa linea cellulare dimostra una notevole capacità di up-regolare l'espressione della cheratina, compresi i tipi di cheratina indotti dalla ferita come la Krt6a, in condizioni specifiche come il trattamento con l'estratto di radice di Morus alba. La reattività delle cellule Kera-308 al forbolo 12-miristato 13-acetato (PMA) evidenzia la loro utilità nello studio dei meccanismi cellulari alla base della riparazione e della rigenerazione cutanea.

Una caratteristica distintiva delle cellule Kera-308 è la loro risposta alla proliferazione dose-dipendente, che può essere significativamente aumentata da stimoli esterni come l'estratto di radice di Morus alba. Questa caratteristica rende le Kera-308 uno strumento eccellente per sondare le basi molecolari della proliferazione e della differenziazione dei cheratinociti in risposta agli agenti terapeutici.

Inoltre, il profilo trascrizionale delle cellule Kera-308 in scenari di guarigione delle ferite, in particolare l'aumento della regolazione del filamento di cheratina e della segnalazione CXCL12/CXCR4, fornisce preziose indicazioni sulle dinamiche cellulari e molecolari in gioco durante la riparazione della pelle. Il coinvolgimento di queste vie di segnalazione sottolinea l'importanza delle cellule Kera-308 nell'esplorazione di nuove strategie terapeutiche per migliorare la guarigione delle ferite e trattare i disturbi della pelle.

Tessuto
La pelle
Malattia
Papilloma della pelle di topo
Sinonimi
  • KERA-308
  • 308
  • Line 308

02Classificazione

Organismo
Mouse
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Tipo di cellula
Cheratinocita

04Identificatori

Riferimento bibliografico
Kera-308 (numero di catalogo Cytion 400429)
Codice fiscale NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_5782

05Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM, w: 4,5 g/L di glucosio, w: 4 mM di L-Glutammina, w: 3,7 g/L di NaHCO3, w: 1,0 mM di piruvato di sodio (articolo Cytion numero 820300a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
TrypLE Express (Life Technologies)
Subcoltura
Rimuovere il terreno e sciacquare le cellule aderenti con PBS senza calcio e magnesio (3-5 ml di PBS per T25, 5-10 ml per le fiasche di coltura T75). Aggiungere Tryple Express (1-2 ml per T25, 2,5 ml per fiasche di coltura cellulare T75), coprendo completamente il foglio cellulare. Incubare a 37 gradi per 15 minuti. Risospendere accuratamente le cellule con 10 ml di terreno (se necessario, utilizzare un raschietto per cellule), centrifugare per 5 minuti a 300xg, risospendere le cellule in terreno fresco e distribuirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
1 x 104 cellule/cm2
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Recupero post-scongelamento
Dopo lo scongelamento, piastrare le cellule a 5 x 104 cellule/cm2 e lasciare che le cellule si riprendano dal processo di congelamento e aderiscano per almeno 24 ore.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

07Donatore

Razza / sottospecie
BALB/c