Siirry sisältöön
NCI-H209-solut
Kudos
Keuhkot
Sairaus
Pienisoluinen karsinooma
Metastaasikohde
Luuydin
Synonyymit
H209, H-209, NCIH209

Asiakirjat

NCI-H209-solut

Cell line · Tuotenumero 300183

A.F. Gazdar ja hänen työryhmänsä eristivät NCI-H209-solulinjan vuonna 1979 pienisoluista keuhkosyöpää sairastavan potilaan luuytimestä. Luuydin...

€430.00ilman veroja ja toimituskuluja
Valmistetaan tilauksesta
1

01Yleistä tietoa

Kuvaus
A.F. Gazdar ja kumppanit saivat NCI-H209-solulinjan vuonna 1979 pienisoluista keuhkosyöpää sairastavan potilaan luuytimestä. Luuydinnäyte otettiin ennen hoitoa. Linja on klassinen SCLC-solulinja, joka ilmentää kohonneita neljän biokemiallisen merkkiaineen (neuronispesifinen enolaasi, kreatiinikinaasin aivojen isoentsyymi, L-DOPA-dekarboksylaasi ja bombesiinin kaltainen immunoreaktiivisuus) tasoja. C-myc-DNA-sekvenssejä ei monisteta. Karkeaa rakenteellista DNA-poikkeavuutta ei havaittu. Kyseessä on solulinja, joka kasvaa suurina aggregaatteina suspensiossa. Ainoastaan aggregaatit ovat elinkelpoisia, mutta mitään merkityksellistä elinkelpoisuusprosenttia ei voida mitata. Väliaine sisältää yleensä suuria määriä solujätteitä. Solut ilmentävät RB1:n poikkeavaa muotoa, joka ei ole fosforyloitunut, mikä johtuu ilmeisesti yhden pisteen mutaatiosta koodonissa 706 (Cys-> Phe).
Kudos
Keuhkot
Sairaus
Pienisoluinen karsinooma
Metastaasikohde
Luuydin
Synonyymit
  • H209
  • H-209
  • NCIH209

02Luokittelu

Organismi
Ihminen
Sukupuoli
Mies
Kasvuominaisuudet
Jousitus
Bioturvallisuustaso
1

03Ominaisuudet

Morfologia
Epiteelin kaltainen
Kasvaimia aiheuttava
Kyllä, muodostaa siirtokelpoisia kasvaimia, joilla on tyypillinen SCLC-histologia alasti elävissä hiirissä

04Tunnisteet

Lähdeviite
NCI-H209 (Cytionin luettelonumero 300183)
NCBI-verotunnus
9606
Cellosaurus
CVCL_1525

05Ilmentyminen ja alttius

Proteiinin ilmentyminen
P53 negatiivinen
Isoentsyymit
G6PD, B, PGM1, 1-2, PGM3, 1, ES-D, 1, Me-2, 0, AK-1, 1, GLO-1, 1-2, Fenotyyppien frekvenssituote = 0,0624
Tuotteet
Linja tuottaa normaalin määrän p53-mRNA:ta suhteessa normaaliin keuhkoon.

06Käsittely ja viljely

Viljelyalusta
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiilia glutamiinia, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytionin artikkelinumero 820700a)
Inkubaatioilma

37 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä.

Ravintolisät
Täydennetään elatusainetta 10 %:lla FBS:llä
Soluviljely
Poista vanha väliaine tarttuneista soluista ja pese ne PBS:llä, josta puuttuu kalsiumia ja magnesiumia. Käytä T25-pulloissa 3-5 ml PBS:ää ja T75-pulloissa 5-10 ml. Peitä sitten solut kokonaan Accutase-valmisteella, käyttäen 1-2 ml T25-pulloissa ja 2,5 ml T75-pulloissa. Anna solujen inkuboitua huoneenlämmössä 8-10 minuuttia solujen irtoamiseksi. Inkuboinnin jälkeen solut sekoitetaan varovasti 10 ml:n väliaineella niiden resuspendoimiseksi ja sentrifugoidaan sitten 300xg:n nopeudella 3 minuutin ajan. Hävitä supernatantti, suspendoi solut uudelleen tuoreeseen väliaineeseen ja siirrä ne uusiin pulloihin, jotka sisältävät jo tuoretta väliaineita.
Kylvötiheys
1 x 105 solua/ml
Nesteen uusiminen
2-3 kertaa viikossa
Sulatus ja viljely
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Laadunvalvonta ja kryosäilytys

Hedelmättömyys

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Jäädytysaine
Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa (mukaan lukien FBS) + 10 % DMSO:ta riittävän sulatuksen jälkeisen elinkelpoisuuden varmistamiseksi tai CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytyksen aiheuttamaa stressiä.
Säilytysolosuhteet

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Toimitusehdot

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

08Lahjoittaja

Luovuttajan ikä
55 vuotta
Etnisyys
Kaukasialainen