Siirry sisältöön
DH82
Sairaus
Koiran histiosyyttinen sarkomi
Synonyymit
DH-82, DH 82

Asiakirjat

DH82

Cell line · Tuotenumero 305003

DH-82 cells, derived from the malignant histiocytosis of a ten-year-old male Golden Retriever, are a cornerstone in the study of canine immunology and rel...

€430.00ilman veroja ja toimituskuluja
Varastossa
Lot
Suositeltava (tuorein erä)
1

01Yleistä tietoa

Kuvaus

DH-82-solut, jotka on saatu kymmenvuotiaan kultaisen noutajan pahanlaatuisesta histiosytoosista, ovat kulmakivi koirien immunologian ja siihen liittyvien sairauksien tutkimuksessa.

Näillä soluilla on makrofagin kaltainen morfologia, joka heijastaa ihmisen makrofagien keskeisiä toimintoja, ja ne tarjoavat siten asianmukaisen mallin koirien terveyden eri näkökohtien ja erityisesti immuunijärjestelmään liittyvien sairauksien tutkimiseen.

DH-82-solujen ominaispiirre on niiden kyky fagosytoida lateksihiukkasia, mikä on elimistön vieraiden aineiden poistamisesta vastaavien makrofagien olennainen tehtävä. Tämän ominaisuuden ansiosta DH-82-solut ovat vankka väline koirien immuunivasteiden tutkimiseen erityisesti infektioiden ja tulehdussairauksien yhteydessä. Fc-gammareseptorien ilmentyminen DH-82-soluissa on merkittävä piirre.

Nämä reseptorit ovat olennainen osa immuunivastetta, sillä ne sitoutuvat vasta-aineisiin ja helpottavat vasta-aineella päällystettyjen patogeenien tai hiukkasten fagosytoosia. Tämä tekee DH-82-soluista erityisen arvokkaita tutkimuksissa, joissa keskitytään immuunivasteisiin ja vasta-aineesta riippuvaiseen solusytotoksisuuteen (ADCC). DH-82-solut eivät sen sijaan ilmentä Fc mu- ja C3b-reseptoreita.

Fc mu -reseptorien, joita tavallisesti esiintyy B-soluissa ja jotka osallistuvat antigeenien esittelyyn, ja C3b-reseptorien, jotka sitoutuvat komplementtiproteiineihin immuunivasteissa, puuttuminen tarjoaa kontrolloidun ympäristön sellaisten erityisten immuunimekanismien tutkimiseen, joihin nämä reseptorit saattavat vaikuttaa.

Lisäksi DH-82-solut eivät tuota IL-1:tä, joka on keskeinen sytokiini tulehdusreaktioissa. Tämä ominaisuus tarjoaa ainutlaatuisen näkökulman IL-1:n roolin tutkimiseen erilaisissa biologisissa prosesseissa ja IL-1:n välittämien sairauksien ymmärtämiseen.

Tartuntatautien alalla DH-82-solut ovat osoittautuneet erityisen hyödyllisiksi tutkittaessa koiran monosyyttistä ehrlichioosia (CME), Ehrlichia canis -bakteerin aiheuttamaa puutiaisaivotautia.

Solut tarjoavat bakteerin kasvulle suotuisan ympäristön, mikä auttaa tutkimaan taudin kehitystä ja mahdollisia hoitomuotoja. DH-82-solujen kaksinkertaistumisaika, noin 26 tuntia, on myös kriittinen näkökohta niiden käytössä ja vaikuttaa koesuunnitteluun ja tulosten tulkintaan.

Sairaus
Koiran histiosyyttinen sarkomi
Synonyymit
  • DH-82
  • DH 82

02Luokittelu

Organismi
Koira
Sukupuoli
Mies
Kasvuominaisuudet
Kiinnittynyt
Bioturvallisuustaso
1

03Ominaisuudet

Morfologia
Makrofagin kaltaiset
Solutyyppi
Histiosyytti

04Tunnisteet

Lähdeviite
DH82 (Cytionin tuotenumero 305003)
NCBI-verotunnus
9615
Cellosaurus
CVCL_2018

05Käsittely ja viljely

Viljelyalusta
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamiini, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytionin artikkelinumero 820100a)
Inkubaatioilma

37 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä.

Ravintolisät
Täydennetään elatusainetta 10 % FBS:llä ja 1 % NEAA:lla
Dissosiaatioreagenssi
Accutase
Soluviljely
Poista vanha väliaine tarttuneista soluista ja pese ne PBS:llä, josta puuttuu kalsiumia ja magnesiumia. Käytä T25-pulloissa 3-5 ml PBS:ää ja T75-pulloissa 5-10 ml. Peitä sitten solut kokonaan Accutase-valmisteella, käyttäen 1-2 ml T25-pulloissa ja 2,5 ml T75-pulloissa. Anna solujen inkuboitua huoneenlämmössä 8-10 minuuttia solujen irtoamiseksi. Inkuboinnin jälkeen solut sekoitetaan varovasti 10 ml:n väliaineella niiden resuspendoimiseksi ja sentrifugoidaan sitten 300xg:n nopeudella 3 minuutin ajan. Hävitä supernatantti, suspendoi solut uudelleen tuoreeseen väliaineeseen ja siirrä ne uusiin pulloihin, jotka sisältävät jo tuoretta väliaineita.
Nesteen uusiminen
2-3 kertaa viikossa
Sulatus ja viljely
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Laadunvalvonta ja kryosäilytys

Hedelmättömyys

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Jäädytysaine
Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa (mukaan lukien FBS) + 10 % DMSO:ta riittävän sulatuksen jälkeisen elinkelpoisuuden varmistamiseksi tai CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytyksen aiheuttamaa stressiä.
Säilytysolosuhteet

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Toimitusehdot

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

07Lahjoittaja

Rotua / alalajia
Kultainennoutaja
Luovuttajan ikä
10 vuotta