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DH82
Malattia
Sarcoma istiocitico canino
Sinonimi
DH-82, DH 82

Documenti

DH82

Cell line · Codice prodotto 305003

DH-82 cells, derived from the malignant histiocytosis of a ten-year-old male Golden Retriever, are a cornerstone in the study of canine immunology and rel...

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01Informazioni generali

Descrizione

Le cellule DH-82, derivate dall'istiocitosi maligna di un Golden Retriever maschio di dieci anni, sono una pietra miliare nello studio dell'immunologia canina e delle malattie correlate.

Queste cellule presentano una morfologia simile a quella dei macrofagi, che rispecchia le funzioni chiave dei macrofagi umani, fornendo così un modello rilevante per studiare vari aspetti della salute canina, in particolare le condizioni legate al sistema immunitario.

Una caratteristica distintiva delle cellule DH-82 è la loro capacità di fagocitare particelle di lattice, una funzione essenziale dei macrofagi responsabili dell'eliminazione di sostanze estranee nell'organismo. Questa proprietà posiziona le cellule DH-82 come un solido strumento per approfondire le risposte immunitarie dei cani, soprattutto di fronte a infezioni e malattie infiammatorie. L'espressione dei recettori Fc gamma nelle cellule DH-82 è una caratteristica notevole.

Questi recettori sono parte integrante delle risposte immunitarie, poiché si legano agli anticorpi e facilitano la fagocitosi di agenti patogeni o particelle rivestite di anticorpi. Ciò rende le cellule DH-82 particolarmente preziose negli studi incentrati sulle risposte immunitarie e sulla citotossicità cellulare anticorpo-dipendente (ADCC). Al contrario, le cellule DH-82 non esprimono i recettori Fc mu e C3b.

L'assenza dei recettori Fc mu, tipicamente presenti sulle cellule B e coinvolti nella presentazione dell'antigene, e dei recettori C3b, che si legano alle proteine del complemento nelle risposte immunitarie, fornisce un ambiente controllato per esaminare i meccanismi immunitari specifici che potrebbero essere influenzati da questi recettori.

Inoltre, le cellule DH-82 non producono IL-1, una citochina fondamentale nelle risposte infiammatorie. Questa caratteristica offre una prospettiva unica per studiare il ruolo dell'IL-1 in vari processi biologici e per comprendere le malattie IL-1-mediate.

Nel campo delle malattie infettive, le cellule DH-82 si sono dimostrate particolarmente utili nello studio dell'ehrlichiosi monocitica canina (ECM), una malattia trasmessa dalle zecche e causata da Ehrlichia canis.

Le cellule forniscono un ambiente favorevole alla crescita del batterio, favorendo l'esplorazione dello sviluppo della malattia e dei potenziali trattamenti. Anche il tempo di raddoppiamento delle cellule DH-82, circa 26 ore, è un aspetto critico nel loro utilizzo, che influenza il disegno sperimentale e l'interpretazione dei risultati.

Malattia
Sarcoma istiocitico canino
Sinonimi
  • DH-82
  • DH 82

02Classificazione

Organismo
Cane
Sesso
Maschio
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Simile ai macrofagi
Tipo di cellula
Istiocita

04Identificatori

Riferimento bibliografico
DH82 (numero di catalogo Cytion 305003)
Codice fiscale NCBI
9615
Cellosaurus
CVCL_2018

05Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamina, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (articolo Cytion numero 820100a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS e l'1% di NEAA
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

07Donatore

Razza / sottospecie
Golden Retriever
Età dei donatori
10 anni