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Cellules NCH690
Tissu
Cerveau
Maladie
Glioblastome

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Cellules NCH690

Cell line · Référence du produit 300120

La lignée cellulaire NCH640 est un modèle de cellules de type souche de glioblastome utilisé dans la recherche pour étudier les mécanismes de résistance tumorale, la survie cellulaire en situation de stress…

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1

01Informations générales

Description

La lignée cellulaire NCH640 est un modèle de cellules souches de glioblastome utilisé dans la recherche pour explorer les mécanismes de résistance tumorale, la survie cellulaire sous stress et les réponses thérapeutiques. Le glioblastome, l'une des formes les plus agressives de tumeurs cérébrales, est difficile à traiter en raison de sa résistance à la thérapie et de son adaptation à un microenvironnement hostile. NCH640 est cultivé dans des milieux spécialisés tels que Neurobasal A avec des suppléments tels que B27, et sa croissance est soutenue par des facteurs de croissance essentiels tels que l'EGF et le FGF-2. Elle est souvent utilisée avec d'autres modèles de cellules souches de gliome, comme NCH690 et NCH644, pour étudier ces phénomènes biologiques.

La recherche sur NCH640 se concentre fortement sur ses mécanismes de résistance, en particulier dans des conditions hypoxiques. Les cellules de gliome comme NCH640 dépendent fortement des adaptations métaboliques, y compris de la régulation des espèces réactives de l'oxygène (ROS). Des études ont démontré que le ciblage de voies telles que la réponse intégrée au stress (ISR) dans NCH640 et les lignées cellulaires apparentées peut améliorer leur sensibilité à des thérapies telles que le témozolomide, qui est couramment utilisé dans le traitement du glioblastome. Ces résultats sont importants pour l'élaboration de nouvelles stratégies visant à surmonter la résistance inhérente des cellules souches de gliome aux interventions thérapeutiques standard.

Tissu
Cerveau
Maladie
Glioblastome

02Classification

Organisme
Humain
Sexe
Femme
Propriétés de croissance
Adepte
Niveau de biosécurité
1

03Caractéristiques

Tumorigène
Oui

04Identifiants

Référence
NCH690 (numéro de catalogue Cytion 300120)
Numéro d'identification fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_x915

05Manipulation et culture

Milieu de culture
DMEM:Ham's F12 (1:1), w : 3.1 g/L Glucose, w : 2.5 mM L-Glutamine, w : 15 mM HEPES, w : 0.5 mM Sodium pyruvate, w : 1.2 g/L NaHCO3 (numéro d'article Cytion 820400a)
Atmosphère d'incubation

37°C, 5%CO2, atmosphère humidifiée.

Compléments alimentaires
Ajouter au milieu 5 mg/L d'héparine, 20 ng/mL de bFGF, 20 microgrammes/L d'EGF, 5 mg/L d’insuline, 100 mg/L de transferrine, 5,2 microgrammes/L de sélénite de sodium, 6,3 microgrammes/L de progestérone, 161,1 microgrammes/L de putrescine, 50 mg/L d’hydrocortisone
Repiquage
Pour la sous-culture des cultures sphéroïdes, commencez par dissocier mécaniquement les sphéroïdes par pipetage de haut en bas 5 à 10 fois à l'aide d'une pipette Eppendorf avec des embouts filtrants de 1000 μl. Après cela, centrifuger le mélange à 300g pendant 5 minutes à température ambiante pour culotter les cellules. Jeter le surnageant et remettre en suspension le culot cellulaire dans un milieu de culture frais. Enfin, transférer les cellules remises en suspension dans de nouveaux récipients de culture pour favoriser la formation de sphéroïdes. Cette approche garantit une décomposition efficace des sphéroïdes et les prépare à poursuivre leur croissance dans un nouvel environnement
Densité de semis
1 x 105 cellules/mL
Renouvellement des fluides
2 à 3 fois par semaine
Récupération après le dégel
Après décongélation, laisser les cellules se remettre du processus de congélation pendant au moins 24 à 48 heures.
Décongélation et mise en culture
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Contrôle qualité et cryoconservation

Stérilité

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes basées sur la luminescence.

Pour s'assurer de l'absence de contamination bactérienne, fongique ou levurienne, les cultures cellulaires font l'objet d'inspections visuelles quotidiennes.

Milieu de congélation
Comme milieu de cryoconservation, nous utilisons 50 % de milieu basal + 40 % de FBS + 10 % de DMSO, ou CM-1 (numéro de catalogue 800100 de Cytion), qui contient des osmoprotectants et des stabilisateurs métaboliques optimisés pour améliorer la récupération et réduire le stress induit par la cryoconservation.
Conditions de stockage

Pour une conservation à long terme, placer les flacons dans de l'azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre -150 et -196 °C environ. Le stockage à -80 °C n'est acceptable qu'en tant qu'étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l'azote liquide.

Conditions de livraison

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées sur glace sèche dans des emballages isolés et validés, avec suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d'environ -78 °C tout au long du transport. À la réception, inspecter immédiatement le conteneur et transférer sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

07Donateur

Âge du donneur
78 ans
Origine ethnique
Caucasien