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Células NCH690
Tecido
Cérebro
Doença
Glioblastoma

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Células NCH690

Cell line · Número do produto 300120

A linha celular NCH640 é um modelo de células semelhantes às células estaminais do glioblastoma, utilizado na investigação para explorar os mecanismos de resistência tumoral e a sobrevivência celular em condições de stress...

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01Informações gerais

Descrição

A linha celular NCH640 é um modelo de células estaminais de glioblastoma utilizado na investigação para explorar os mecanismos de resistência tumoral, a sobrevivência celular sob stress e as respostas terapêuticas. O glioblastoma, uma das formas mais agressivas de tumores cerebrais, é difícil de tratar devido à sua resistência à terapia e à adaptação a um microambiente hostil. O NCH640 é cultivado em meios especializados como o Neurobasal A com suplementos como o B27, e o seu crescimento é apoiado por factores de crescimento essenciais como o EGF e o FGF-2. É frequentemente utilizado juntamente com outros modelos de células estaminais de glioma, como o NCH690 e o NCH644, para investigar estes fenómenos biológicos.

A investigação sobre a NCH640 centra-se fortemente nos seus mecanismos de resistência, nomeadamente em condições de hipoxia. As células de glioma como o NCH640 apresentam uma dependência significativa das adaptações metabólicas, incluindo a regulação alterada das espécies reactivas de oxigénio (ROS). Os estudos demonstraram que a seleção de vias como a resposta integrada ao stress (ISR) no NCH640 e em linhas celulares relacionadas pode melhorar a sua sensibilidade a terapias como a temozolomida, que é habitualmente utilizada no tratamento do glioblastoma. Estas descobertas são importantes para a conceção de novas estratégias destinadas a ultrapassar a resistência inerente das células estaminais do glioma às intervenções terapêuticas habituais.

Tecido
Cérebro
Doença
Glioblastoma

02Classificação

Organismo
Humano
Sexo
Feminino
Propriedades de crescimento
Aderente
Nível de biossegurança
1

03Características

Tumorigénico
Sim

04Identificadores

Referência
NCH690 (número de catálogo Cytion 300120)
Número de identificação fiscal do NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_x915

05Manuseamento e cultura

Meio de cultura
DMEM:Ham's F12 (1:1), com: 3,1 g/L de glucose, com: 2,5 mM de L-Glutamina, com: 15 mM de HEPES, com: 0,5 mM de piruvato de sódio, com: 1,2 g/L de NaHCO3 (número de artigo Cytion 820400a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Adicione ao meio 5 mg/L de heparina, 20 ng/mL de bFGF, 20 microgramas/L de EGF, 5 mg/L de insulina, 100 mg/L de transferrina, 5,2 microgramas/L de selenito de sódio, 6,3 microgramas/L de progesterona, 161,1 microgramas/L de putrescina e 50 mg/L de hidrocortisona
Subcultura
Para subcultura de culturas de esferóides, começar por dissociar mecanicamente os esferóides através de pipetagem para cima e para baixo 5 a 10 vezes utilizando uma pipeta Eppendorf com pontas de filtro de 1000 μl. Depois disso, centrifugar a mistura a 300 g durante 5 minutos à temperatura ambiente para sedimentar as células. Deitar fora o sobrenadante e ressuspender o pellet de células em meio de cultura fresco. Por fim, transferir as células ressuspensas para novos recipientes de cultura para promover a formação de novos esferóides. Esta abordagem assegura uma decomposição eficiente dos esferóides e prepara-os para um crescimento contínuo num novo ambiente
Densidade de sementeira
1 x 105 células/mL
Renovação de fluidos
2 a 3 vezes por semana
Recuperação após o descongelamento
Após a descongelação, deixar as células recuperarem do processo de congelação durante, pelo menos, 24 a 48 horas.
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos 50% de meio basal + 40% de FBS + 10% de DMSO, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

07Doador

Idade do dador
78 anos
Etnia
Caucasiano