Pereiti prie turinio
Audinys
Embrionas
Liga
Normalūs pelės embrioniniai fibroblastai (Ku80/XRCC5 genų išjungimas; SV40 virusu imortalizuoti; be NHEJ)
Metastazių vieta
Netaikoma (imortalizuotos MEF ląstelės; tai nėra klinikinis naviko mėginys)
Sinonimai
Ku80-/- MEF

Dokumentai

Ku 80-/-

Cell line · Prekės numeris 305258

€550.00neįskaitant mokesčių ir pristatymo išlaidų
Yra sandėlyje
Lot
Rekomenduojama (šviežiausia partija)
  • CoA
1

01Bendra informacija

Aprašymas

Ku80-/- MEF (pelės embrioninio fibroblasto) ląstelės yra genetiškai modifikuotos fibroblastų ląstelės, gautos iš pelių, neturinčių Ku80 geno (XRCC5). Ku80 baltymas kartu su Ku70 sudaro Ku heterodimerą, kuris yra būtinas DNR dvigubos grandinės pertrūkio (DSB) pataisos nehomologinio sujungimo (NHEJ) būdui. Ku80 nebuvimas šiose ląstelėse sumažina jų gebėjimą veiksmingai taisyti DSB, todėl jos yra vertingas NHEJ kelio vaidmens genomo stabilumui, DNR taisymo mechanizmams ir vėžio biologijai tirti modelis.

Ku80-/- MEF ląstelės yra jautresnės jonizuojančiajai spinduliuotei ir kitiems DNR žalojantiems veiksniams dėl sutrikusio DSB atstatymo gebėjimo. Šios ląstelės taip pat linkusios kaupti chromosomines aberacijas ir pasižymi genomo nestabilumu. Ku80 trūkumas turi įtakos ne tik DNR taisymui, bet ir kitiems ląstelių procesams, pavyzdžiui, V(D)J rekombinacijai, kuri yra labai svarbi kuriant įvairų antikūnų repertuarą ir T ląstelių receptorius imuninėje sistemoje.

Tyrimai, atlikti naudojant Ku80-/- MEF ląsteles, suteikė svarbių įžvalgų apie NHEJ molekulinius mechanizmus ir platesnes DNR atstatymo defektų pasekmes. Šie tyrimai labai svarbūs siekiant suprasti vėžio ir kitų ligų, susijusių su genomo nestabilumu, vystymąsi. Be to, jie padeda ištirti galimus terapinius taikinius, skirtus DNR taisymui vėžinėse ląstelėse sustiprinti, taip padidinant vėžio gydymo, kuris remiasi DNR pažeidimų naviko ląstelėse sukėlimu, veiksmingumą.

Audinys
Embrionas
Liga
Normalūs pelės embrioniniai fibroblastai (Ku80/XRCC5 genų išjungimas; SV40 virusu imortalizuoti; be NHEJ)
Metastazių vieta
Netaikoma (imortalizuotos MEF ląstelės; tai nėra klinikinis naviko mėginys)
Paraiškos
NHEJ DNR remonto tyrimai; Ku80/XRCC5 funkcija; DNR dvigrandžių lūžių (DSB) remontas; genominio nestabilumo modeliavimas; jautrumas radiacijai; V(D)J rekombinacija; vėžio biologija; genotoksiškumo tyrimai; reakcija į DNR pažeidimus
Sinonimai
  • Ku80-/- MEF

02Klasifikacija

Organizmas
Pele
Seksas
Nenurodyta
Augimo savybės
Prisijungęs
GMO statusas
GMO-S1
Išsami informacija apie GMO statusą
GMO-S1: This MEF line carries homozygous Ku80 (XRCC5) knockout and SV40 large T antigen immortalization. The SV40 transgene is stably integrated. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biologinio saugumo lygis
2

03Charakteristikos

Morfologija
Į fibroblastus panašus
Ląstelių tipas
Fibroblastai

04Identifikatoriai

Nuoroda
Ku 80-/- (Cytion katalogo numeris 305258)
NCBI mokesčių identifikavimo kodas
10090
Cellosaurus
CVCL_UJ16

05Išraiška ir jautrumas

Mutacijų profilis
Mutacija: Ku80-/-
Virusai
Transformantas: Simiano virusas 40 (SV40)

06Laikymas ir auginimas

Maitinamoji terpė
DMEM, š: 4,5 g/l gliukozės, š: 4 mM L-glutamino, š: 3,7 g/l NaHCO3, š: 1,0 mM natrio piruvato (Cytion gaminio numeris 820300a)
Inkubacijos aplinka

37 °C, 5 %CO2, drėkintoje atmosferoje.

Maisto papildai
Papildykite terpę 10 % FBS
Disociacijos reagentas
Accutase
Subkultūrinis auginimas
Pašalinkite seną terpę nuo prilipusių ląstelių ir nuplaukite jas PBS, kuriame nėra kalcio ir magnio. T25 kolboms naudokite 3-5 ml PBS, o T75 kolboms - 5-10 ml. Tuomet visiškai užpilkite ląsteles "Accutase", naudodami 1-2 ml T25 kolboms ir 2,5 ml T75 kolboms. Leiskite ląstelėms inkubuotis kambario temperatūroje 8-10 minučių, kad jos atsiskirtų. Po inkubacijos atsargiai sumaišykite ląsteles su 10 ml terpės, kad jos vėl suspenduotų, tada 3 minutes centrifuguokite 300xg greičiu. Išmeskite supernatantą, vėl sutirpinkite ląsteles šviežioje terpėje ir perkelkite jas į naujas kolbas, kuriose jau yra šviežia terpė.
Atšildymas ir auginimas
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kokybės kontrolė ir kriokonservavimas

Sterilumas

Mikoplazmos užterštumas atmetamas taikant PGR pagrįstus tyrimus ir liuminescencinius mikoplazmos aptikimo metodus.

Siekiant užtikrinti, kad nebūtų užteršimo bakterijomis, grybeliais ar mielėmis, ląstelių kultūros kasdien vizualiai tikrinamos.

Šaldymo terpė
Kaip kriokonservavimo terpę naudojame visišką augimo terpę (įskaitant FBS) + 10 % DMSO, kad būtų užtikrintas tinkamas gyvybingumas po atšildymo, arba CM-1 (Cytion katalogo numeris 800100), kurioje yra optimizuotų osmoprotektorių ir medžiagų apykaitos stabilizatorių, kad būtų pagerintas atsigavimas ir sumažintas kriokonservavimo sukeltas stresas.
Laikymo sąlygos

Norėdami ilgai saugoti, įdėkite buteliukus į garų fazės skystą azotą maždaug -150-196 °C temperatūroje. Laikymas -80 °C temperatūroje yra priimtinas tik kaip trumpas tarpinis etapas prieš perkeliant į skystąjį azotą.

Pristatymo sąlygos

Kriokonservuotos ląstelių linijos gabenamos ant sauso ledo patvirtintoje, izoliuotoje pakuotėje su pakankamu kiekiu šaldymo skysčio, kad pervežimo metu būtų palaikoma maždaug -78 °C temperatūra. Gavę pakuotę, nedelsdami ją apžiūrėkite ir nedelsdami perkelkite mėgintuvėlius į tinkamą saugyklą.

08Donoras

Donoro amžius
12-13 vaisiaus dienų
Etninė priklausomybė
Netaikoma (pelės ląstelių linija)