Ku 80-/-

As células Ku80-/- MEF (fibroblastos embrionários de camundongo) são células fibroblásticas geneticamente modificadas, derivadas de camundongos que não possuem o gene Ku80 (XRCC5). A proteína Ku80, em conjunto com a Ku70, forma o heterodímero Ku, essencial para a via de junção de extremidades não homólogas (NHEJ) no reparo de quebras de fita dupla (DSB) do DNA. A ausência de Ku80 nessas células prejudica sua capacidade de reparar DSBs de forma eficaz, tornando-as um modelo valioso para o estudo do papel da via NHEJ na estabilidade genômica, nos mecanismos de reparo do DNA e na biologia do câncer.

As células MEF Ku80-/- apresentam maior sensibilidade à radiação ionizante e a outros agentes que causam danos ao DNA devido à sua capacidade comprometida de reparo de DSBs. Essas células também tendem a acumular aberrações cromossômicas e apresentam instabilidade genômica. A ausência de Ku80 afeta não apenas o reparo do DNA, mas também outros processos celulares, como a recombinação V(D)J, que é crucial para o desenvolvimento de um repertório diversificado de anticorpos e receptores de células T no sistema imunológico.

Pesquisas utilizando células MEF Ku80-/- proporcionaram insights significativos sobre os mecanismos moleculares da NHEJ e as implicações mais amplas do reparo defeituoso do DNA. Esses estudos são cruciais para a compreensão do desenvolvimento do câncer e de outras doenças associadas à instabilidade genômica. Além disso, eles auxiliam na exploração de possíveis alvos terapêuticos para potencializar o reparo do DNA em células cancerosas, melhorando assim a eficácia dos tratamentos contra o câncer que dependem da indução de danos ao DNA nas células tumorais.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.